AKTA 制备型液相色谱蛋白分析仪 纯化蛋白步骤.docVIP

AKATA 制备型液相色谱蛋白分析仪 纯化蛋白步骤 首先是所有溶液抽滤，超声波(主要是去除溶液中的气泡)； 开机(仪器自检)，点开Unicorn ，选 default ,ok；clear all (即出现流程图界面)； 首先将20%乙醇换为超纯水； Mannul，点任意选项，出现操作对话框； Pump---flow=1.0 ，execute，(注意：必须先设定流速，使其形成通路；即有流速时再作其他操作)。此时观察柱压，柱压切记≤0.3Mpa；如果柱压高，则要更长时间洗。 柱压基本稳定时，洗泵：pump---pumpwashpurifier----------A1 ON B1 ON execute；这项仪器自动完成；完成后自动恢复为上一步的状态； 此时还应该注意柱压。注意中间有多次平衡状态出现：一种状态进入另一种状态时，一般要平稳几个柱体积； 此时可以洗上样环； 待平衡时换液：pause，A1---------A液 B1---------B液，continue，然后达到平衡态； 洗泵：pump---pumpwashpurifier-------A1 ON B1 ON execute；此时A泵走A液，B泵走B液 此时可以安装镍柱； 待稳定下来准备上样：将流速降下来，flow=0.5 ，先是load (默认)状态下，将蛋白溶液用注射器打入上样环(上样环是2 ml 的，所以一般最多上样2 ml ，否则浪费；)； 然后改为inject状态，execute ，待走出2.5 柱体积时重新改为load状态，平衡几个柱体积；如果中间需上样多次，load , execute; pause; 加样后，continue; inject , execute; 同样图上显示≥2 ml 时改状态为load; 非目的蛋白不会挂在柱子上，此时出现蛋白峰，在峰上时收穿透； 平衡后，洗脱。准备接收纯化出的蛋白，改流速flow=1.0 ，gradient；100%B 8 min; execucte; 待B%≥20% 时，设定 pump---outletvalve----feed,execute frac-----0.5 ml，execute; 首先出现的是杂蛋白的峰，也可以接收。一般第二个峰是目的蛋白。接收完后，吸收值的曲线会一直上升，是咪唑的吸收。不再接收时，Frac=0，execute； pump-------outletvalve------wasteF1 咪唑吸收值平行，然后再走几个柱体积； B液已达100%，停止走B液：gradient=0 (即0%B); time=0 min ; 这时走A液，冲洗整个体系；之后，pause，将A,B液换为20%乙醇 continue，洗系统； 洗泵，步骤同上； 洗feed 系统；之后feed 改为 wasteF1；摘下镍柱； 此时上样环已经独立，可随时洗； 此时也会有柱压过高的问题，可能是20%乙醇内有气泡造成的。洗好后，-----end 关闭所有窗口，关机。 前期摇菌，诱导，破碎，蛋白纯化用溶液的配制有待详细列出。 结束实验 实验结束后，必须将系统清洗后，才能关机。 清洗管道： 系统泵管清洗，