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SiRNA 目录  HYPERLINK /wiki/%73%69%52%4E%41?hf=youdaocitiaopf=youdaocitiao \l 1 1 siRNA的特点  HYPERLINK /wiki/%73%69%52%4E%41?hf=youdaocitiaopf=youdaocitiao \l 3 2 siRNA的设计方法  HYPERLINK /wiki/%73%69%52%4E%41?hf=youdaocitiaopf=youdaocitiao \l 5 3 siRNA的制备  HYPERLINK /wiki/%73%69%52%4E%41?hf=youdaocitiaopf=youdaocitiao \l 7 4 参考资料  HYPERLINK /wiki/%73%69%52%4E%41?hf=youdaocitiaopf=youdaocitiao \l 1 1 siRNA的特点  HYPERLINK /wiki/%73%69%52%4E%41?hf=youdaocitiaopf=youdaocitiao \l 3 2 siRNA的设计方法  HYPERLINK /wiki/%73%69%52%4E%41?hf=youdaocitiaopf=youdaocitiao \l 5 3 siRNA的制备  HYPERLINK /wiki/%73%69%52%4E%41?hf=youdaocitiaopf=youdaocitiao \l 7 4 参考资料 siRNA(Small interfering RNA )：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。 siRNA - siRNA的特点 siRNA有如下特点：1. 长度约在22nt左右。2. 依赖Dicer酶的加工，是Dicer的产物，所以具有Dicer产物的特点。3. 生成需要Argonaute家族蛋白存在。4. 是RISC组分。5. siRNA合成是由双链的RNA或RNA前体形成的。6. siRNA是人工体外合成的，通过转染进入人体内，是RNA干涉的中间产物。7. 结构上， siRNA是双链RNA。8. 在Dicer酶的加工过程中， siRNA对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。9. 在作用位置上， siRNA可作用于mRNA的任何部位。10. 在作用方式上， siRNA只能导致靶标基因的降解，即为转录水平后调控。11. siRNA不参与生物生长，是RNAi的产物，原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。 siRNA - siRNA的设计方法 关于设计siRNA以及siRNA设计对siRNA功能的影响，还没有可靠的规律。虽然可以通过对mRNA实验分析准确的找到一段基因的全部siRNA最佳作用位置，但这个过程十分耗时且昂贵，不推荐常规实验使用。一种做法是每个目标序列设计3－4对siRNAs，实验选择较有效的siRNA。???siRNA设计大都根据Tuschl的实验，要点如下： 1.目标基因开放阅读框起始密码下游75至100碱基位置开始，寻找“AA”二连序列后的19个碱基序列。（用非“AA”的“XY”序列后的19个碱基序列同样可以得到很好效果的siRNA）。 设计siRNA时不要针对5’和3’端的非编码区。 2.分析获得的序列，选择GC比在40-55%之间的靶基因序列作为优选。 3.将潜在的序列和相应的基因组数据库（人，或者小鼠，大鼠等等）进行比较，排除和其他编码序列/EST同源的序列。例如使用BLAST等。 4.如果选择shRNA，有报道显示9个寡核苷酸的环是最有效的。 下面是另一个设计的版本，大致相同： 1.? 从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3’端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究结果显示GC含量在30%—50%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更为效。Tuschl等建议在设计siRNA时不要针对5’和3’端的非编码区（untranslated regions，UTRs)，原因是这些地方有丰富的调控蛋白结合区域，而这些UTR结合蛋白或者翻译起始复合物可能会影响siRNP核酸内切酶复合物结合mRNA从而影响siRNA的效果。 2.? 将潜在的序列和相应的基因组数据库（人，或者小鼠，大鼠等等）进行比较，排除那些和其他编码序列/EST同源的序列。例如使用BLAST（  HYPERLINK /BLAST/ /BLAST/）? 3.? 选出合适的目标