重组DNA技术要点.pptVIP

一、原核表达体系 1. 不同表达方式的优缺点 (1) 非融合型表达 ◆ 优点：与真核生物体内蛋白质结构最相似，功能 最相近。 ◆ 缺点：容易被细菌蛋白酶所破坏。 (2) 融合型表达 ◆ 优点：可以抵御细菌蛋白酶的破坏，融合蛋白比 天然的外源蛋白更加稳定 ◆ 缺点：需要去除原核多肽。 ◆ 原核多肽切除方法：化学裂解法和酶解法。 (3) 分泌表达 ◆ 优点：防止大肠杆菌对表达产物的降解，减轻大肠 杆菌代谢负荷和恢复表达产物天然构象。 ◆ 包涵体益处：防止蛋白酶对表达蛋白的降解，有利于表达产物分离纯化。 ◆ 包涵体缺点：表达蛋白不具有生物活性，必须溶解包涵体并对表达蛋白进行复性。 2. 包涵体(inclusion body) ◆ 是大肠杆菌高效表达外源基因时形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒，在显微镜下观察时为高折射区，与细胞质中的其他成分有明显的区别。 二、真核表达体系 1. 酵母表达体系 (1) 酵母表达体系具有诸多优点： ① 可以对蛋白进行多种翻译后修饰 ② 培养简单 ③ 自身分泌蛋白少，是理想的分泌型表达系统 ④ 具有较高的安全性，如啤酒酵母表达体系 ⑤ 分离纯化的过程比较简单 (2) 酵母表达体系实例