重组子的筛选与鉴定讲义.pptxVIP

NJU 重组子的筛选（screening）与鉴定;第一节、有关概念;转化子与非转化子;重组子：含有重组DNA分子的转化子。 非重组子：仅含有空载体分子的转化子。;期望重组子与非期望重组子;转化子、重组子、期望重组子关系 ;筛选（screening）;鉴定;选择标记基因（selectable marker gene）;报告基因（reporter gene）;第二节、大肠杆菌重组体的筛选;一、质粒载体转化大肠杆菌细胞的筛选;插入失活筛选法的应用;带双抗生素抗性标记的质粒载体转化大肠杆菌的筛选方法;例;空载体转化菌落及 重组载体转化菌落;筛选具体做法;影印平板培养法;利用lacZ′基因的插入失活筛选重组子—蓝白筛选法 ;蓝白筛选菌落生长照片;X-gal;IPTG及其作用;大肠杆菌乳糖操纵子基因组成;例1:pUC8中lacZ′基因的插入失活;例二：pGEM-3Z中lacZ′基因的插入失活;（二）插入表达筛选;二、 重组噬菌体DNA转入大肠杆菌后重组子的筛选;（二）插入型载体;选择标记基因;1、利用lacZ′基因的插入失活筛选重组噬菌斑 ;2、λ噬菌体的cI基因的插入失活筛选——cI筛选法 ;Polylinker插入不影响lacZ′基因表达;噬菌斑;2、 cI基因插入失活筛选; ;3、spi-筛选;三、杂交筛选;第三节、转化/重组酵