血清白蛋白的分离与纯化蛋白定量测定资料.ppt

血清白蛋白的分离与纯化、蛋白定量测定 实验目的 掌握DEAE纤维素层析法分离纯化蛋白的方法 掌握考马斯亮兰法测定蛋白质的原理 DEAE纤维素层析法分离纯化白蛋白 离子交换层析基本原理 根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法 以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式 离子交换剂 离子交换剂由基质、电荷基团（或称功能基团）和反离 子组成。基质一般是不溶性聚合物，如纤维素，交联葡聚糖， 交联琼脂糖等； 树脂 －O — N+(CH3)2 — OH- 纤维素－O — CH2— COO-— Na＋ 基质 电荷基团 反离子 阳离子交换剂 阴离子交换剂 离子交换剂的选择 考虑因素： 1.被分离物质带何种电荷 2.被分离物质分子的大小 大分子物质选用凝胶，其次选用纤维素 3.被分离物质所处的环境 4.被分离物质的物理化学性质 5.被分离物质的大概数量 对于两性蛋白而言，结合力取决于其等电点以及溶液的pH值。 离子交换纯化原理 如果要分离纯化一种具有兼性离子特性的生物大分子， 其离子化的程度取决于它所在溶液中的净电荷。 生物分子带电荷与否，或带什么样的电荷，主要决定于溶液的pH值。 溶液的pHpI，生物大分子带负电荷，解离成负离子 溶