分子生物学课堂作业技术分析.doc

一、简述microRNA加工成熟的主要步骤 由RNApolⅡ启动子启动转录，得一具有帽子结构和多聚胺苷酸尾巴的pri-miRNA为初产物。 Pri-miRNA在核内经RNaseⅡ enzyme Drosha,DGCR8及一个双链RNA结合蛋白组成的“微处理器”复合物处理。Drosha从pri-miRNA发夹结构末端切下八个核苷酸得到3’端有两个碱基位点，5’端为磷酸盐基团的茎环结构的产物，即pre-RNA。 3.miRNA由基因组中某个基因座位转录生成具有5’端帽子结构和多聚腺苷酸尾巴的pri-miRNA。之后在Drosha/DGCR8作用下加工成为pre-miRNA，再经Exportin-5转运至细胞质pre-miRNA经过Dicer的进一步剪切形成成熟miRNA，miRNA再与RISC以不完全互补的方式结合。 二、设计siRNA控制特定基因表达时，序列选择上有哪些注意事项？ RNAi最后要通过siRNA片段和靶基因结合并使之降解。 1 siRNA序列在靶基因中的位置 从靶基因起始密码子AUG下游50～100个核苷酸开始搜寻理想的siRNA序列，越靠近靶基因的3′端，其基因沉默效果可能越好。 2 siRNA序列的起始碱基与长度 SiRNA序列最好为AA(N n)UU(N 代表任意碱基。 3 siRNA 3′端突出碱基的选择 当siRNA 的3′端突出碱基为UU时，其基因抑制效率最