【创新方案】2016年高中生物人教版选修三教师用书1.1DNA重组技术的基本工具资料.doc

一、基因工程的概念 二、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1．简称：限制性核酸内切酶又称限制酶。 2．来源：主要从原核生物中分离纯化出来。 3．作用 (1)识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列。 (2)切割特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 4．作用结果：产生黏性末端或平末端。 三、DNA连接酶——“分子缝合针” 1．作用 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，拼接成新的DNA分子。 2．种类 　种类比较项目　　　 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 特点 只能“缝合”具有互补的黏性末端的双链DNA片段 既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端 四、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1．种类 (1)质粒：是一种很小的双链环状DNA分子。 (2)其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 2．特点 (1)能够进行自我复制。 (2)有一个至多个限制酶切割位点，供外源基因插入。 (3)具有特殊的标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 (4)对受体细胞无害。 3．作用结果 将外源基因送入受体细胞。 五、重组DNA分子的模拟操作 1．材料用具：剪刀代表EcoR Ⅰ，透明胶条代表DNA连接酶。 　　2.切割要点 (1)先分别从两块硬纸板上的一条DNA链上找出G—A—A—T—T—C序列，并选G—A之间作切口进行“切割”。 (2)然后再从另一条链上互补的碱基之间寻找EcoR Ⅰ相应的切口剪开。 一、限制性核酸内切酶(限制酶) 阅读教材P4～5，分析图1－2、1－3，探究下列问题： 1．限制酶切割DNA分子时，其切割部位在哪里？具有怎样的作用特点？ 提示：(1)切割部位是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 (2)作用特点：①具有专一性。具体表现在两个方面：识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列；切割特定序列中的特定位点。②可用于DNA的切割，获取目的基因和切割载体。 2．利用限制酶切割得到的是黏性末端或平末端，二者有什么区别？ 提示：(1)黏性末端：是限制酶在识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开形成的，如图所示。 (2)平末端：是限制酶在识别序列的中心轴线处切开形成的，如图所示。 具有黏性末端的DNA片段能够通过互补碱基间的配对重新结合，而具有平末端的DNA片段不容易结合。 二、DNA连接酶 阅读教材P5并观察分析图1－4，讨论下列问题： 1．DNA连接酶的作用目的是什么？作用于哪种化学键？ 提示：(1)作用目的：将切下的黏性末端或平末端重新拼接、缝合，形成新的DNA分子。 (2)作用的化学键：磷酸二酯键。 2．根据图示分析： (1)图中a酶、b酶分别是哪种酶？ 提示：a是限制酶(或限制性核酸内切酶)；b是DNA连接酶。 (2)两种酶在基因工程中有什么作用及应用。 提示： 作　用 应　用 限制性核 酸内切酶 使特定部位的磷酸二酯键断裂 用于提取目的基因和切割载体 DNA连接酶 在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键 用于目的基因和载体的连接 三、载体 阅读教材P6，观察分析图1－5，探讨下列问题： 1．具备什么条件的物质才能充当基因工程的载体？ 提示：载体必须具备的条件： (1)能在受体细胞内稳定保存并大量复制。 (2)有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。 (3)具有某些特殊标记基因，以便进行筛选。当然，载体应对受体细胞无毒害作用，否则受体细胞将受到损伤甚至死亡。 2．联系主动运输中的载体，试从它们的化学本质和作用方面分析二者的不同。 提示：(1)主动运输中的载体是位于细胞膜上的蛋白质，其作用是运输离子、氨基酸、核苷酸等物质进出细胞。 (2)基因工程中的载体的化学本质是DNA，其作用是： ①携带目的基因进入受体细胞；②利用载体在宿主细胞中的复制对目的基因进行大量复制。 　如图为DNA分子结构示意图，下列对该图的描述正确的是(　　) A．④的名称是胞嘧啶脱氧核苷酸 B．解旋酶作用的部位是⑩ C．某限制性核酸内切酶可选择⑨处作为切点 D．DNA连接酶可连接⑩处断裂的化学键 [解析]　图中④包含上一个脱氧核苷酸的磷酸①和下一个脱氧核苷酸的五碳糖②和碱基③，不是一个脱氧核苷酸，A错误；限制性核酸内切酶的作用部位是⑩磷酸二酯键，解旋酶的作用是解开DNA双链，作用部位是⑨氢键，B、C错误；DNA连接酶可连接⑩处断裂的磷酸二酯键，D正确。 [答案]　D 与DNA有关的几种酶的比较 项目种类 　 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 DNA分子 DNA分子片段 脱氧核苷酸 DNA分子 作用部位 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键 结果 形成黏性末端或平末端