福建农林大学蛋白质工程期末总结重点分析.docx

蛋白质工程定义：以蛋白质的结构和功能为基础，通过基因修饰或基因合成而改造现存蛋白质或组建新型蛋白质的现代生物技术。一级结构：蛋白质分子中各个氨基酸残基的排列顺序 二级结构:一段连续的肽单位借助于氢键，在一维方向排量成具有周期性结构的构想三级结构：多肽链在二级结构的基础上在进一步盘区或折叠成具有一定规律的三维空间结构四级结构：由两条或两条以上的具有三级结构的多肽链聚合而成特定构象的蛋白质分子叫蛋白质的四级结构超二级结构：是指若干相邻的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形成有规则的，在空间上能辨认的二级结构组合体结构域：二级结构和结构模体以特定的方式组织连接，在蛋白质分子中形成2个或多个空间上可以明显区分的三级折叠实体同源蛋白质指不同的有机体中实现同一功能的蛋白质变构效应蛋白质在表达功能的过程中构象发生变化的现象蛋白质的变性天然蛋白质因受到物理和化学的因素影响，使蛋白质严格的空间结构受到破坏，从而引起蛋白质若干理化性质和生物学性质的改变，这种现象称为蛋白质变性作用。 复性:是指变性的蛋白质在使它变性的理化条件恢复正常后,它的结构和功能可以部分恢复的性质分子伴侣是进化上十分保守的蛋白质家族，广泛存在于多种生物体内，其主要作用是与新生肽或部分折叠的蛋白质的疏水表面结合，帮助新翻译的蛋白的折叠或组装成天然构象的进程，并防止其相互聚集和错误折叠。分子内伴侣将对蛋白质折叠有帮助的前导肽称为分子内伴侣。定位突变：基于天然蛋白质结构的蛋白质分子“小改”是指对已知结构的蛋白质进行少数几个残基的修饰、替换或删除等包含体：包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒生物信息学：生物分子信息的获取、存贮、分析和利用一次数据库：数据直接来源于实验获得的原始数据，仅对原始数据进行简单的归类整理和注释盐析：蛋白质在高浓度中性盐溶液中会沉淀析出透 析：按照分子大小进行分离.分离取决于透析袋截留的分子量。等电点沉淀法：在一定的pH条件下，蛋白质所带的净电荷为零，分子之间的静电排斥力最小，因而容易聚集形成沉淀蛋白质组是指基因组表达的全部蛋白质及其存在方式。蛋白质芯片也叫蛋白质微阵列是将大量蛋白质有规则地固定到某种介质载体上，利用蛋白质与蛋白质、酶与底物、蛋白质与其他小分子之间的相互作用检测分析蛋白质的一种芯片蛋白检测芯片：将具有高度亲和特异性的蛋白质或多肽，如单克隆抗体、小片段抗体、受体等固定在载体上信号肽：引导新合成的蛋白质向分泌通路转移的短（长度5-30个氨基酸）肽链蛋白质的化学修饰：通过活性基团的引入或去除使蛋白质化学(一级)结构发生改变的过程蛋白功能芯片将天然蛋白、酶或酶底物固定在载体上制成芯片质谱技术：生物质谱技术的基本原理是样品分子离子化后，根据不同离子间质荷比（m/z）的差异化来分离并确定分子质量穿梭载体：构建的具有两种宿主(例如，大肠杆菌和酿酒酵母)复制原点的质粒双向电泳第一向通常根据蛋白质等电点的不同进行等电聚焦电泳（IEF），然后再根据分子质量的不同进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）作为第二向。蛋白质工程的应用：提高重组蛋白的活性、热稳定性及抗氧化能力，增强对胞内蛋白酶的抗性，延长体内半衰期，降低制品的免疫原性，改变酶促反应的Km与Vmax，改变酶的底物专一性，改变酶的别构调节部位，减少反馈抑制，简化纯化过程，提高产率蛋白质功能：催化/结构成分/存储/运动/转运/调节/支架/蛋白质大分子的应用：广泛应用于纺织/食品/医药/农业等领域，酶制剂的工业用途如清洁，聚氨基酸的应用去垢剂。氨基酸的理化性质：旋光性：除甘氨酸外，都具有旋光性光吸收：酪氨酸（Tyr、278nm）、色氨酸(Trp、279)和苯丙氨酸(Phe、259)能够吸收紫外光——共轭双键紫外吸收：在中性pH值下，色氨酸和酪氨酸的紫外吸收峰在280nm，而苯丙氨酸的在260nm处。蛋白质变性的本质：二、三、四级空间结构被破坏，变性因素破坏了维持蛋白质空间结构的各种次级键以及二硫键。 但一级结构完好，变性蛋白的特征：（1）生物活性的丧失——最主要标志 （2）理化性质的改变：溶解度下降，易沉淀、结晶能力丧失、渗透压力、和扩散速度降低粘度、旋光性负值上升，等电点上升 （3）生化性质的改变特征：分子伴侣的功能及特征帮助新翻译的蛋白的折叠或组装成天然构象的进程，并防止其相互聚集和错误折叠。（1）同类分子伴侣在所有的生物中有惊人的相似性，表明它们在进化很保守;（2）分子伴侣在行使功能时需水解以改变构象、释放底物和进行再循环;（3）能识别暴露的未折叠的蛋白质结构域，能与多种不同的多肽相互作用，影响折叠的速率和动力学，无序列偏爱性。蛋白质分子设计的原则：1．活性设计2．对专一性的设计3．Scaffold设计(框架)4．疏水基团与亲水基团需合理分布5．最优的氨基酸侧链几何排列影响外源基因在