1、基因工程技术方案.pptVIP

（五）人类基因组计划的研究价值 医学领域：将人类感知生命的里程提高到分子水平阶段，大大加速人们对疾病基因的鉴定； 生命科学领域：阐明基因的结构与功能关系，细胞的发育、生长、分化的分子机理，疾病发生的机理等，有利于理解生物是如何进化的； 促进生命科学与信息科学相结合：生物信息学； 技术经济价值：医药、保健、农业和食品制造等产业。 （六）后基因组研究 功能基因组学： 蛋白质组学： 基因功能鉴定、基因表达分析及突变检测； 分析基因编码产物——蛋白质的结构、功能和蛋白质群体内相互作用。 糖组学： 研究糖的合成、降解及调控，糖复合物的修饰、糖的分析测序及功能等。 * 奧斯華?艾弗里 Oswald Avery * * * * * * * * 1. 提取目的基因： （1）直接分离基因： 常用于原核生物。 （2）人工合成基因：P15 b 、化学合成法：市售的胰岛素基因，干扰素基因 “鸟枪法”： P14 （五）基因操作的基本步骤： a 、酶合成法 b、反转录法 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 基因操作的基本步骤 “鸟枪法”提取目的基因（图） 含原胰岛素基因的重组体DNA在大肠杆菌中表达（图） 三种目的基因提取方法的优缺点 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 专一性最强 化学合成法 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性强 反转录法 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 操作简便广泛使用 鸟枪法 缺 点 优 点 2、DNA片段与载体重组 基因的剪刀——限制性内切酶（一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割 DNA分子） 基因的针线——DNA连接酶 基因的运输工具——运载体（如质粒、噬菌体和动植物病毒等） 1、基因的剪刀―限制性内切酶，限制性内切酶（一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割 DNA分子） 限制性内切酶 限制酶 限制性内切酶 分布：主要在微生物中。 作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。 结果：产生黏性未端（碱基互补配对）。 举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫做黏性末端。 思考 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就可以合成重组的DNA分子了。 2、基因的针线―DNA连接酶 用同种限制性内切酶切割异源DNA，获得黏性末端，使碱基互补 用DNA连接酶连接主链 3、基因的运输工具―运载体 DNA连接酶 连接的部位：磷酸二酯键（梯子的扶手），不是氢键（梯子的踏板）。 基因的运载体 p25 运载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 外源基因（如抗虫基因）导入受体细胞（如棉花细胞）需要运输工具——运载体。 运载体的作用： 1、作为运载工具，将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 作为运载体的几个必备条件：P24 常用运载体 质粒：P25 噬菌体 动、植物病毒 质粒 质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 质粒能够“友好”地“借居”在宿主细胞中。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。但是，质粒的复制则只能在宿主细胞内完成。 3、目的基因导入受体细胞的方法 1、将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 2、使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 3、目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 P19 目的基因的检测和表达 检测：通过检测标记基因的有无来判断目的基因是否导入。 表达：通过特定性状的产生与否来确定目的基因是否表达。 苏云金杆菌能够产生一种只