使用OxytonaISSR分子标记罂粟的分子特征重点分析.docVIP

使用Oxytona ISSR分子标记罂粟的分子特征 摘 要：大红罂粟第Oxytona Bernh种，属于罂粟属，广泛存在于土耳其本土植物。它们含有的高生物碱含量具有重要商业价值。因为罂粟属部分Oxytona也有类似的形态特征，所以不容易区分这些种类。我们使用的跨简单重复序列（ ISSR ）分子标记系统，以确定本节的分子特征。在这项研究中，从土耳其的5个不同地区收集到180个品种，用20个ISSR引物就行研究。共获得82条带，其中80为多态。平均遗传距离是0.35，香农指数为0.50，多态率为96.97 ％。引物AT10数目带最少，而引物AT19和AT3拥有最大数量。总之， ISSR标记系统可以用于第Oxytona分类。 关键词：罂粟； Oxytona ； ISSR ；分子标记；系统发育 1引言 土耳其是许多物种基因起源的地方。属于罂粟科的物种分布在北半球。有世界各地50类群和110种罂粟在土耳其自然生长。罂粟有许多种类，包括多年生草本植物，由大红罂粟石斛，荭体育L.和P.伪东方。他们的生物碱含量十分的重要，如可待因和蒂巴因P.伪东方种质采自埃尔津詹省，锡瓦斯，通杰利，和尼代的野外植物，保藏号为分别99 ，23，135 ，。四个大红罂粟品种都来自农业部的安卡拉大学学院。所有品种都根据染色体数目计算，他们归纳为4 P.乌饭， P. 50荭， 106 P.伪东方，和20个未知种质。将植物种植在Gaziosmanpa?a大学的研究领域。 DNA的提取 从180个品种提取新鲜的嫩叶。总DNA采用Fermentas公司的基因组DNA提取试剂盒隔离 DNA制备物以1 ％琼脂糖凝胶电泳定量。用100的终浓度纳克mL-1的分离的DNA用于PCR分析 2.3 ISSR分析 二十个ISSR引物（ AT1 - AT20通用引物）是从?ontek （ ?ontek有限公司，土耳其）获得。每次25毫升PCR反应含20纳克基因组DNA模板，10X缓冲液无镁（ BioBasic ，加拿大），20毫米硫酸镁10毫米的dNTPs ， 1单位Taq DNA聚合酶（ Promega公司，美国） ，和0.4微米每个ISSR引物。 PCR amplificationswere在阿波罗仪表ATC401梯度热循环仪进行。在94℃下进行PCR扩增程序为5分钟，接着进行40个循环：94 ℃30秒，在42-63 ℃下进行60秒，并在72℃持续2分钟。最后，该过程被延长为72℃ 7分钟。扩增产物进行表征于1％琼脂糖凝胶（浸渍）在120伏2.5小时，可视化用溴化乙锭（0.5克/毫升）在UV光下，然后使用凝胶 - 逻辑200影像系统（伊斯曼 - 柯达公司，美国）拍照。 ISSR分子片段的大小是由使用1 kb的DNA梯（ SibEnzyme M11 ，美国）为标准估算。 3 .结果 二十个ISSR引物对180种质进行分析。ISSR引物产生82条带??，平均每个引物扩增2.20条带。 82单但形态， 80呈多形性，多态率为96.97 ％ 。与每个引物检测到的多态性条带数为3 （ AT10 ）到5（ AT3和AT19 ） 。遗传相似系数矩阵与非加权对群法的引物构建的算术平均值。树状图显示了180份种质间的关系，构建（图） 。该Nei氏指数相似系数的值介于0到1之间，平均为0.35 。不包括具有0.00的相似系数的植物， 90对植物以0.09的相似系数;最远的遗传距离出现在15对植物，Shannon指数为0.50。 系统发育分析产生的2大组， A和B ，即由16和17个亚类，分别为（图） 。根据种群染色体数目检查，有14条染色体的集中在4组。28条染色体集中只有1组，并与42条染色体集中在8组植物。根据群各区域检查，从尼代本身集中在13个组收集的植物，从埃尔津詹区域集中在1组中，与除此以外的区域的植物没有表现出分离本分子标记系统之前已经作为一种有效的工具，用于评估系统发育关系，并在水仙节Pseudonarcissi遗传多样性（希门尼斯等人， 2009） ，大麦（ Wang等， 2009） ，萝卜（刘等人。 ， 2008） ，胡芦（ Dangi等， 2004） ，和P.催眠种质（阿查里雅与夏尔马，2009） 。这些研究给出更好地了解物种的关系和发展育种策略线索。间的分子标记系统，在ISSR标记技术是受欢迎的，因为它不需要对基因组的先验知识及其应用简单（阿拉姆等人，2009 ; Huang等，2009 ;的Bayraktar ＆阿寒湖2011 ;哈姆扎等人， 2012） 96.97 ％）的比例很高。在ISSR标记系统观察到的遗传变异的高水平是与已经使用的部分Oxytona RAPD分子标记的结果一致。多态性率比RAPD84.3 ％的多态性高（ Parmaks?z ＆奥兹坎， 2011）