高效液相色谱重点分析.pptxVIP

高效液相色谱 ---------- 原理与方法 ;第一节 基本原理和术语 第二节 高效液相色谱系统 第三节 正相和反相高效液相色谱 第四节 其它高效液相色谱方法 第五节 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤 第六节 高效液相色谱的应用;第一节 基本原理和术语 液相色谱是指流动相为液体的色谱，包括传统的柱色谱、薄层色 谱和纸色谱。20世纪50年代后气相色谱法在色谱理论研究和实验技 术上迅速崛起，而液相色谱技术仍停留在经典操作方式，其操作繁 琐，分析时间冗长，因而未受到重视。20世纪60年代以后，随气相 色谱法对高沸点有机物分析局限性的逐渐显现，人们又重新认识到 液相色谱法可弥补的气相色谱法的不足之处。因此，自20世纪60年 代末期，液相色谱得到重视。 高效液相色谱的定性和定量分析原理和方法与气相色谱基本相同。; 经典液相色谱（柱色谱）法使用粗粒多孔固定相，并装填在大口 径、长玻璃管内。流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传 质和扩散速度缓慢，因而仅有低柱效、分析时间冗场。高效液相色 谱法使用了全多孔微粒固定相，装填在小口径、短不锈钢柱内，流 动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱仪，溶质在固定相的传质、 扩散速度大大加快，从而在短的时间内获得高柱效和高分离能力。 与气相色谱比较，高效液相色谱与气相色谱有许多不同之处。气 相色谱具有选择性高、分离效率高、灵敏度高和分析速度快的特点。 但它仅适于分析蒸气压低和沸点低的样品，而不适用于分析高沸点、 高分子量和热稳定定性差的有机物以及生物活性物质，因而使其应 用受到限制。在全部有机化合物中仅有20%的样品适用于气相色谱分析。这两种方法的比较可见下表。;液相色谱和气相色谱的方法比较;高效液相色谱的特点： 分离效能高 由于新型高效微粒固定填料的使用，液相色谱填充柱的柱效可达 2?103 ? 5?104 块/米理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱 103 块/米理论塔板数的柱效。 选择性高 由于液相色谱柱具有高效，并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性。因此，高效液相色谱法不仅可以分析不同类型的有机物及其同分异构体，还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体。 检测灵敏度高 在高效液相色谱中使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度。如被广泛使用的紫外吸收检测器，最小间储量可达10-9g；用于痕量分析的荧光检测器，最小检出量可达10-12g。 分析速度快 由于高压输液泵的使用，相对于经典液相色谱，其分析时间大大缩短。完成一个样品的分析时间仅需几分钟到几十分钟。; 高效液相色谱法具有上述优点，但也有下述局限性： 在高效液相色谱法中，使用多种溶剂作为流动相，分析所需成本高于气相色谱法，且易引起环境污染。但进行梯度洗脱操作时，它比气相色谱法的程序升温操作复杂。 高效液相色谱法中缺少如气相色谱法中使用的通用型检测器，如热导监测器和氢火焰离子化检测器。近年来蒸发激光散射检测器的应用日益增多，有望发展成为高效液相色谱法的一种通用型检测器。 高效液相色谱法不能替代气相色谱法，对于要求柱效高达104 块理论塔板数以上的有机样品，必须用毛细管气相色谱法分析才有效。 高效液相色谱法也不能代替中和低压柱色谱法，对于在高压下易分解和变性的具有生物活性的生化样品，不能使用高效液相色谱。;基本术语 （1）流动相 液相色谱的流动相就是一种或多种溶剂混合的液体， 通过色谱柱运动，携带被分离的组分，也就是通常所说的洗脱剂。 大多数液相色谱分离是利用双溶剂作为洗脱剂，它们其中的一个往 往对固定相表面的相互作用是惰性的。 对于反相高效液相色谱，其流动相中的一个溶剂是水，它与疏水 的吸附剂表面不发生作用，不与组分竞争吸附剂表面的位置。对于 正相高压液相色谱，其流动相中的一个洗脱剂往往是正己烷，也不 与极性的硅胶表面相互作用。 任何一个双向溶剂中另外一个溶剂都是活性的，它与吸附剂表面 发生相互作用，与被分析的组分竞争吸附表面的吸附位置，随着它 的浓度的增加，导致组分的保留值降低。 ;（2）固定相 固定相是表面带有刚性多孔的固体颗粒，也就是我们 所说的吸附剂。常见的有多孔硅胶以及多孔氧化铝。 （3）分配系数 液相色谱中的分配理论完全符合气相色谱中的分配 理论。色谱分离是在两相中进行的，可以用分配系数来描述。分配 系数是在一定的温度和压力下，溶质分子依据它们在固定液和流动 相中的溶解度，分别进入两相进行分配，当系统达到分配平衡时， 组分在固定液和流动相中的平均浓度值比值为分配常数。分配系数 是一个无因子量，它与组分在固定液的热力学性质有关，并随着柱 温柱压的变化而变化，与固定相和流动相的体积无关。例如，A 和 B 二组分的分离，如果组分的分配系数相同，则色谱峰完全重合； 反之