李馥-纳米技术诊断治疗脑卒中半暗带难题正文讲义.doc

纳米技术诊断治疗脑卒中半暗带难题 李馥louiskoolifu@yahoo.cn 正文： 【所选医学问题】 ： 脑卒中是成人残疾甚至死亡的三大领先疾病之一。其中90%是缺血性。缺血性脑卒中的关键治疗方向在半暗带的挽救。根据大脑缺血区域损伤的不同程度分为缺血中心区和缺血半暗带。在缺血中心区，血流迅速下降，破坏、代谢严重失调，几分钟内导致细胞死亡。然而，在周边区——缺血半暗带受损较轻，尚有侧枝血管供血。半暗带组织是处于低灌注状态的异常组织，为细胞的功能异常，但并不是死亡状态，它与梗死核心在一个血管分布区，既可以挽救也可以进展为坏死。在缺血早期，半暗带细胞仍能积极代谢葡萄糖，细胞死亡相对较慢。 所以，干预半暗带细胞死亡的多种机制为治疗脑缺血提供了更好的策略。1 【纳米技术切入点】 ： ●传统的溶栓治疗是静脉注射重组组织型纤溶酶原激活剂（rt - PA），但是在欧洲与北美已有6.4%的治疗者出现颅内出血，证明为过度治疗。在这种困境下，纳米治疗带来更多可能性和改善的机会。 ●我所关注的已有技术： 将溶栓酶（SK）修饰在全氟化碳纳米粒（Perfluorocarbon NPs）表面，用于靶向血凝块，使纤维蛋白溶酶原（plasminogen）转换为纤维蛋白溶酶（plasmin）。作用使其溶解。 纳米粒绑定在斑块上，增加了有针对性的超声表面造影成像。 超声造影是通过造影剂来增强血液的背向散射，使血流清楚显示，从而达到对某些疾病进行鉴别诊断目的的一种技术。由于在血液中的造影剂回声比心壁更均匀，而且造影剂是随血液流动的，不易产生伪像。 通过观察血块溶解，可以发现纳米粒子对于纤维酶原的转换具有诱导促进的作用，时间小于60min。2 同时，已经保证了载物纳米粒子能通过血脑屏障，则其满足的条件可能有： ⑴纳米粒子与脑毛细血管内皮细胞结合，药物由于浓度梯度的作用而被动 的进入脑内。 ⑵被脑内皮细胞通过吞饮作用摄取。 ⑶中性的，亲水的，粒径小于200nm的纳米粒子可以最好地进行体内长循环。3 这是该技术成功的前提。 这是纳米粒子结合血栓病将其消灭的图片： 实验图： 【个人思考与创新】 ： ①创新理由： 脑缺血可造成脑组织损伤，再灌注可导致进一步损伤，致使脑组织细胞生理功能破坏，发生一系列病理生化改变，受损细胞释放出LDH,CK，再经受损血脑屏障进入血液循环。同时，机体在病理状态下，LDH活性增强，催化乳酸氧化，此是机体自动调节的保护性代偿机制，且梗死面积越大，细胞破坏越多，LDH,CK活性增强。 缺血再灌注损伤机制，与氧自由基关系密切。正常机体氧自由基与清除出于动态平衡，但脑缺血再灌注损伤时，通过各种机制，使氧自由基生成增加，内源性的自由基清除减少，对脑组织产生破坏作用。通过升高SOD的活性，可起到清除氧自由基的作用，对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。 SOD是一种金属蛋白，可以通过歧化反应清除O,从而保护细胞不受毒性氧自由基的损害。 缺血所引起的组织损伤是致死性疾病的主要原因。但很多证据显示，在缺血一段时间后又突然恢复供血（重灌注）时才出现损伤。其中主要是由活性氧自由基引起的微血管与实质器官损伤。使用葡萄籽提取物自由基清除剂对缺血再灌流组织损伤有保护作用。葡萄籽中富含原花青素，是多酚类化合物，属于生物类黄酮。具有抗脂质过氧化，清除自由基，抗炎的作用。4-6 Idea：如果在修饰有溶栓酶的全氟化碳纳米粒上再度修饰葡萄籽原花青素分子，在溶栓的同时清除半暗带里过度产生的氧自由基，可以减慢其坏死的速度。达到延长时间窗的效果。 构想图： ②创新理由： 转化生长因子TGFβ是由112个氨基酸残基组成的分子量为25kD的双聚体活性多肽，与细胞膜上相应的三种受体结合而发挥作用。脑缺血后TGFβ表达明显增多，可抵御脑缺血损伤，其作用机制可能与TGFβ稳定细胞内钙浓度，拮抗兴奋性氨基酸的神经毒性，抗氧化，抗细胞凋亡和促血管增生等有关。 当我们再加倍给予半暗带区TGFβ，使抗凋亡更加明显，对组织其凋亡或坏死，挽救半暗带更加有效。7-9 Idea：如果在修饰有溶栓酶和葡萄籽原花青素的全氟化碳纳米粒上再度修饰TGFβ氨基酸链（可体外成功合成），在溶栓的同时，清除半暗带里过度产生的氧自由基的同时，我们可以加倍给予半暗带区TGFβ分子，使抗凋亡更加明显，并且也能抗氧化，促血管增生，对阻止其凋亡或坏死，挽救半暗带更加有效。 构想图： ③存在的问题： 其中肯定存在优先与哪个结合的问题，比如复合纳米粒子与血凝块先作用，还是与氧自由基先作用，还是TGFβ受体先作用，或是可以分段作用，这些都有待考量，要进一步实验区论证。 ④最终的复合纳米粒子作为造影剂，进行超声脑血管造影，观察脑血流量的变化以及血栓的消除情况，最终对中风引起的坏死区与半暗带区进行治疗评估，检测治