酶的固定化讲义.docVIP

酶的固定化及其应用 摘要：固定化酶不仅在化学、生物学及生物工程、医学及生命科学等学科领域的研究异常活跃, 得到迅速发展和广泛的应用, 而且因为具有节省资源与能源、减少或防治污染的生态环境效应而符合可持续发展的战略要求。本文对固定化酶，酶的固定化技术以及其的应用作了简要的介绍。 关键词：固定化酶，固定化，应用 引言 酶是一类具有生物催化功能的分子量适中的蛋白质, 具有极高的催化效率、高度的特异性及控制的灵敏性。酶一经发现就被人们广泛应用在酿造、食品、医药等领域。由于酶催化反应具有底物专一性、催化高效性、反应条件温和等优点，并且一些难以进行的化学反应在酶的催化下能顺利地完成，从而被大家高度重视。酶的开发利用在20 世纪得到了巨大的发展, 但由于大多数酶是水溶性的，并且酶一般必需在温和的条件下才有催化作用,还有稳定性差、 容易失活、难于回收、 不利于连续化生产、产物分离纯化困难、 产品成本较高等缺点，使其在实际运用中也就带来了很多问题, 从而限制了酶制剂产品的使用和开发,为了克服这些缺点固定化酶就产生了。 酶的固定化是用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内, 仍能进行其特有的催化反应、并可回收及重复利用的一类技术。与游离酶相比, 固定化酶在保持其高效专一及温和的酶催化反应特性的同时, 又克服了游离酶的不足之使用、操作连续可控、工艺简便等一系列优点。固定化酶不仅在化学、生物学及生物工程、医学及生命科学等学科领域的研究异常活跃, 得到迅速发展和广泛的应用, 而且因为具有节省资源与能源、减少或防治污染的生态环境效应而符合可持续发展的战略要求。 固定化酶 固定化酶的研究始于1910年, 正式研究于20世纪60年代, 70年代已在全世界普遍开展。酶的固定化是用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内, 仍能进行其特有的催化反应、并可回收及重复利用的一类技术[1]。1916年Nelson和Griffin最先发现了酶的固定化现象后, 科学家就开始了固定化酶的研究工作。1969年日本一家制药公司第1次将固定化的酰化氨基酸水解酶用来从混合氨基酸中生产L-氨基酸, 开辟了固定化酶工业化应用的新纪元。这时人们已经预感到了固定化酶以后可以在现代酶工程以及整个生物工程中占有的重要作用, 它在应用上和理论上的巨大潜力吸引了生物化学、微生物学、医学、化学工程和高分子等领域的科研机构及企业科技部门研究人员的注意力。 与游离酶相比,固定化酶在保持其高效专一及温和的酶催化反应特性的同时, 又克服了游离酶的不足之处, 呈现贮存稳定性高、分离回收容易、可多次重复使用、操作连续可控、工艺简便等一系列优点[2]。 酶的固定化 固定化酶的制备方法有物理法和化学法两大类。物理方法包括物理吸附、包埋法等。物理法固定酶的优点在于酶不参加化学反应, 整体结构保持不变, 酶的催化活性得到很好保留。但是,由于包埋物或半透膜具有一定的空间或立体阻碍作用, 因此对一些反应不适用。化学法是将酶通过化学键连接到天然的或合成的高分子载体上, 使用偶联剂通过酶表面的基团将酶交联起来, 而形成相对分子量更大、不溶性的固定化酶的方法。 3.1传统固定化方法 3.1.1吸附法 利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面而使酶固定化的方法称为物理吸附法, 简称吸附法。吸附法包括物理吸附和离子结合法。吸附法是最早出现的酶固定化方法。工艺简便和条件温和是该方法显著的优点, 可供选择的载体涉及天然或合成的无机与有机高分子材料, 有时酶的纯化与固定化也可同时实现。因酶分子与载体之间的共价结合而呈现良好的稳定性及重复使用性, 共价结合法是目前研究最为活跃的一类酶固定化方法[3]。 物理吸附法常用的吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石等。 该法条件温和, 酶的构象变化较小或基本不变, 因此对酶的催化活性影响小, 但酶和载体之间结合力弱, 在不适pH、高盐浓度、高温等条件下, 酶易从载体脱落并污染催化反应产物等[4]。 3.1.2包埋法 包埋法的基本原理是载体与酶溶液混合后, 借助引发剂进行聚合反应, 通过物理作用将酶限定在载体的网格中, 从而实现酶固定化的方法。该法不涉及酶的构象及酶分子的化学变化, 反应条件温和, 因而酶活力回收率较高。 包埋法专用的载体主要有明胶、聚酰胺、琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺、光交联树脂、海藻酸钠、火棉胶等。包埋法根据载体材料和方法的不同,可以分为凝胶包埋法和微胶囊包埋法。凝胶包埋法是将酶或酶菌体包埋在各种凝胶内部的微孔中, 制成一定形状的固定化酶的方法。微胶囊包埋法是将酶包埋在高分子半透膜中, 制成微胶囊固定化酶的方法。 包埋法固定化酶易漏失, 常存在扩散限制等问题, 催化反应受传质阻力的影响, 不宜催化大分子底物的反应[5]。 3.1.3结合法 选择适宜的载体, 使之