《科研仪器学》总复习概述.doc

一、DNA芯片或基因芯片DNA杂交探针技术与半导体工业技术相。将大量探针分子固定于支持物上后与带荧光标记的DNA样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。PCR技术其基本原理是根据细胞分裂中DNA的半保留复制机理。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。RT-PCR RT-PCR指逆转录PCR, 是指从RNA或mRNA直接扩增获得目的DNA片段的过程.荧光定量PCR 通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对结果进行分析，计算待测样品的初始模板量。 分子筛层析凝胶颗粒内部呈网孔状结构，分子质量大的蛋白质难以进入凝胶颗粒内部，主要从凝胶颗粒的间隙里通过，所受阻滞作用小，所以大分子蛋白质迁移速度快，先流出凝胶 。分子质量小的蛋白质则容易进入凝胶颗粒内部，所受阻滞作用大，所以小分子蛋白质迁移速度慢，后流出凝胶，从而将分子质量大小不同的蛋白质分开。 离子交换层析： 蛋白质是两性分子，在一定的pH条件下带有电荷，不同的蛋白质所带有电荷的种类和数量不同，因此它们与带电的凝胶颗粒间的电荷相互作用不同。这样，当蛋白质混合物流经带电凝胶时，电荷吸引作用小的蛋白质先流过，而电荷吸引作用大的蛋白质后流过凝胶，从而把不同的蛋白质分开。 1．吸附层析由于不同的蛋白质所含有的氨基酸的种类和数目不同，分子表面的极性氨基酸和非极性氨基酸的数目、分布区域不同，因此它与分子比表面积大的吸附剂间的相互作用力大小不同。根据此原理对蛋白质进行分离纯化。 蛋白质组学蛋白质组(proteome)是指基因组表达的全部蛋白质及其存在方式。双向电泳第一向:等电聚焦（IEF）：等电聚焦是利用蛋白质分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的、线形pH梯度中进行蛋白质的分离和分析。第二向:SDS：SDS电泳是根据SDS和还原试剂将蛋白质分子解聚后亚基的大小，在恒定的pH缓冲系统中的分离。生物质谱技术 质谱技术是蛋白质组学研究中最为广泛使用的蛋白质鉴定技术。其基本原理是样品分子离子化后，根据不同离子间质荷比（M/Z）的差异来分离并确定分子质量。质谱技术能从复杂的样本中定性、定量分析蛋白质，其灵敏度高，可达到fmol(10-15)乃至amol(10-18)，速度快，现已经成为蛋白质组研究中主要的蛋白质鉴定技术。 肽质量指纹图谱 MALDI-TOF-MS常用于蛋白质的肽质量指纹图谱(peptidemass finger printing，PMF)鉴定。PMF是指蛋白质被酶切位点专一的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱。由于每种蛋白质的氨基酸序列不同，蛋白质被酶水解后，产生的肽片段序列也各不相同，其肽混合物质量数亦具特征性，所以称为指纹图谱(finger printing)。基质辅助离子化技术 试样溶解或悬浮于基质中，激光束辐射到基质和试样分子上。基质吸收激光束能量后汽化，部分试样分子伴随基质的汽化而解吸。基质吸收大部分激光能量，减少了试样分子被激光能量破坏及过度电离成碎片离子。 18、基因枪法 又称生物弹法或微粒枪法、微粒轰击法，是依赖高速度的金属颗粒将外源基因引入活体细胞的一种转化技术。 19、Western blot(蛋白质印迹技术) 将蛋白质用聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子大小分开，再将蛋白质转移到尼龙膜或其他膜上，用抗体作为探针与之杂交，反应之后用放射自显影或底物显色来检测是否与抗体特异性结合的抗原。与DNA和RNA不同的是，蛋白质的转移只有靠电转移方可完成，反应时用碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶标记或同位素标记第二抗体， 、PCR技术包括变性退火延伸三个基本反应步骤PCR反应体系缓冲液模板DNA引物脱氧核糖核苷三磷酸TaqDNA聚合酶Mg2+组成。 19．蛋白质的分离纯化透析、超过滤、分子筛层析、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳等就是依据蛋白质分子大小进行分离纯化蛋白质的蛋白质的分离纯化等电点沉淀、离子交换层析、等电聚焦电泳等都是依据来分离纯化蛋白质； 蛋白质细分级方法分子筛层析离子交换层析亲和层析聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向电泳、毛细胞电泳、 等电聚焦电泳等蛋白质粗分级方法硫酸铵分级沉淀有机溶剂分级沉淀超速离心等电点沉淀透析超滤蛋白质组研究核心技术蛋白质分离技术(如电泳和多维液相层析)蛋白质鉴定方法(如氨基酸序列分析和质谱技术）生物信息学技术质谱仪关键部件离子源和质量分析器是两个关键的部件。质量分析器决定着质谱的准确度、灵敏度和分辨率等。探针标记同位素非同位素非同位素生物素、地高辛配体、荧光素等 27．国家对分析实验室的用水规格进行了技术规定，将其分为三个级别。其中一级水用于要求严格的分析实验，如液相色谱分析用水等；二级水用于无机痕量分析，如原子吸收光谱分析用水等；三级水用于一般化