SIV+p27单克隆抗体的制备、性质分析与初步应用.pdf

毒SRv、SⅡⅣ无交叉反应，286、2E12与ⅢV p24蛋白有交叉反应。 免疫荧光法检测杂交瘤细胞培养上清效价为1：80～l：2560，腹水效价 原表位。 第二部分是单克隆抗体的纯化和初步应用。我们采用辛酸．硫酸 铵法和ProteinA亲和层析两种方法对不同类别的单抗进行纯化，纯 化效果良好。使用简易过碘酸钠法对单抗进行辣根过氧化物酶标记。 经抗体配对实验确定以2E12为包被抗体、酶标3G3为检测抗体，棋 盘滴定法确定抗体工作浓度后，探索构建了检测SIVp27抗原的双抗 体夹心ELISA法。应用初步建立的双抗体夹心ELISA法，对SⅣ模 型猴血浆标本和SⅢv模型猴病毒分离培养上清标本进行检测，并将 其结果与coulter公司试剂盒检测结果进行了比较。实验数据表明自 建体系可以用于sIVp27抗原的检测，特异性良好，但灵敏度有待于 进一步提高。 本研究成功地建立了能稳定分泌sIVp27单克隆抗体的杂交瘤细 胞株，为SIv／SAIDS及其艾滋病相关研究提供了一个重要工具。对 检测SIV p27抗原的双抗体夹心ELISA法的探索构建，为SIV p27抗 原检测试剂盒的制备奠定了一定的基础。 关键词 SIV；蛋白质p27；杂交瘤；单克隆抗体；ELIsA celllineswereset and Hybridoma upbyusinghybridomatecⅢque four celllines也at s锄is01idculturemedi啪．Intotalof hybridoma stably McAbswcreobtained：1C3锄d286wereofthe secrel尉SlV IgGl p27 was wasofthe subclass subclass，2E12 subcl淞s，3G3 IgG2a of廿他IgG2b matfour celllineswere C11rDmosomeconfi加ed aIlalyses hybridoma cells．AllfourMcAbss110wed SⅣp27 polyploid s仃ongamn毋for Wbst锄1BlotaIldimmunofluorescence proteinbyusing aSsay(IFA)tests， buthadno aIld2E12had SRVSnⅣHoweVer’286 cross-reactivi够wim titersof cmss-reactivit)，wiⅡlⅧVp24proteill．nle hybridoma were1：80～1：320andasciteswere1：10240～l：40960 supemat锄ts showed and3G3wereindicatedto byIFA，respectiVely．2E12 rleco辨ize