阵发性睡眠性血红蛋白尿症造血干%2f祖细胞体外单个细胞培养研究和基质研究初探.pdfVIP

!里堡塑垦型查兰堕主婴茎竺兰垡堡兰—————————————一 的总数低于正常对照(Po．05)。说明病人异常表型细胞在细胞增殖、集落及较大集落形成 的数量上接近正常对照，但单个细胞集落的大小及细胞扩增总数不及正常对照。2)在次级 集落形成能力上，病人异常表型细胞较正常对照减低(Po．001)，说明较为原始的干，祖细胞 的集落形成能力不及正常人。 3 PNH病人正常表型干／祖细胞与正常对照生长的差异 1)PNHCD34+CD59+细胞的细胞分裂比例及形成集落比例同正常对照接近(PO．05)， 但在较大集落形成、单个细胞扩增数量及细胞扩增总数上低于正常对照(P0．01)。说明病 人正常表型细胞在细胞增殖、形成集落的数量上接近正常人；但在较大集落形成的数量、单 个集落的大小及细胞扩增的总数上均逊于正常对照。2)在次级集落形成上，病人 力不及正常人。 三、为了探讨除造血干细胞以外是否存在其它因素引起病人造血异常。应用单个细胞 培养及液体、半固体群体细胞培养方法，将病人血清与正常人血清分别加入培养体系中，观 察不同血清对正常人及病人正常及异常表型的干／祖细胞的直接影响。 1病人及正常人血清对正常人造血干，祖细胞生长的影响 1)在单个细胞培养条件下，加入PNH血清与加入正常人血清比较，正常人造血干／ 祖细胞在细胞分裂、集落形成、较大集落形成的比例、单个细胞扩增能力及细胞总数诸方面 均无明显差别(P0，05)。2)在半固体集落培养时，加入病人或正常人血清，对正常人造 血千，祖细胞形成集落影响无显著差异(P0．05)。3)单独统计从AA转为PNH的病人及有外 周血全血细胞减少的病人(这些病人有与AA相似的临床特点)的数据，其血清同样对正常 人千，祖细胞生长无显著影响(PO．05)。 2病人及正常人血清对病人异常表型造血干，祖细胞生长的影响 1)在单个细胞培养条件下，加入PNH血清与加入正常人血清比较，病人异常表型细 胞在细胞分裂、集落形成、较大集落形成的比例、单个细胞扩增能力及细胞总数上均无明显 差别(Po．05)。2)在半固体集落培养时，异常表型细胞总的集落形成率加入病人血清好于 加入正常人血清(P(0．05)。3)有全血细胞减少的病人(包括合并全血细胞减少的AA．PNH 病人)，上述各生长指标在加入病人血清时均较加入正常入血清好(4例病入的结果)。 3病人及正常人血清对病人正常表型造血干／祖细胞生长的影响 1)在单个细胞培养条件下，加入PNH血清与加入正常人血清比较，病人正常表型细 胞在细胞分裂、集落形成、较大集落形成的比例、单个细胞扩增能力及细胞总数等方面均无 明显差别(P0．05)。2)在半固体集落培养时，加入病人血清与加入正常人血清比较，正常 表型细胞总的集落形成产率无显著性差异(Po．05)。3)有全血细胞减少的病人(包括合并 全血细胞减少的AA-PNH病人)，加入病人血清与加入正常人血清比较，上述各生长指标也 无显著差异。 四、进一步研究与造血密切相关的基质在PNH是否存在异常：首先进行病人骨髓成纤 维细胞集落(CFU-F)的培养，观察其形态及数量是否存在异常；尔后，比较病人与正常人 的基质对正常造血干，祖细胞的支持能力；晟后，用半定量RT．PCR的方法，以自身B-actin 2 中国协和医科大学博士研究生学位论文 a、IL-6(两种与造血调节密切相关的细胞因子)表 作为内参对照，检测病人细胞因子TNF PNH病人骨髓基质细胞对正常人造血千／祖细胞支持能力存在个体差异，骨髓增生不良类似 再障的患者基质支持造血能力较差；骨髓增生活跃患者的基质支持造血能力与正常人相仿。 a和IL一6mRNA表达量与正常人相似。 3)PNH病人骨髓基质细胞的TNF 根据以上结果，本研究得出以下结论： 1 PNH病人骨髓及外周血的CD34+细胞含量均较正常人显著减少，提示病人造血干，祖 细胞在数量上缺乏。病人骨髓CD34+CD59．细胞数量及所占比例与病人临床表现有一定关 胞CD59的表达无关。 2在单个细胞培养条件下，病人的异常表型的干／祖细胞较其正常表型具有一定的生长 优势。但病人无论是正常还是异常表型的干／祖细胞，与正常人