脐血CD133%2b细胞衍生内皮细胞移植改善小鼠肢体缺血研究.pdf

中国协和医科土学硕士研究t论文 第5／71页 脐血CDl33+细胞衍生的内皮细胞的移植改善小鼠肢体 缺血的研究 摘 要 在缺血性疾病中，机体的代偿性反应包括细小动脉形成和血管新生。近来发 现，在骨髓、外周血、脐血和胎肝中存在内皮祖细胞(endothelialcells， progenitor EPC)。细胞移植试验显示，这种细胞参与了机体多种生理、病理性血管重建过程。 我们研究了移植脐血CDl33+细胞来源的血管内皮细胞对小鼠缺血肢体恢复的影 响。脐血CDl33+细胞用免疫磁珠分选后，接种于含VEGF的诱导体系中，培养 10～14天后，收集贴壁细胞，检测其内皮细胞特异标志的表达。将贴壁细胞用 CM—DiI标记后由尾静脉移植到单侧后肢缺血的裸鼠体内。利用荧光示踪移植细胞 的去向，动态监测移植前后患肢的血流灌注和毛细血管密度。为探讨移植细胞趋 化至缺血部位的原因，用半定量RT．PCR比较缺血肢和正常肢肌肉中VEGF mRNA的水平，并观察体外VEGF对诱导出的内皮细胞的趋化作用。荧光示踪发 现移植细胞定向整合到缺血部位新生血管内。动态观测显示相对于对照HUVEC 组及M199无细胞组，毛细血管密度、血流恢复程度及缺血后肢的坏死情况在移 mRNA水平明显上调，体 植诱导来的内皮细胞后皆有明显改善。缺血局部vEGF 外VEGF对诱导后贴壁细胞具有趋化作用。实验结果表明脐血CDl33+细胞包含 有EPC，体外诱导扩增后体内移植能促进肢体缺血的恢复，缺血局部上调的VEGF 表达可能是EPC定向整合到缺血局部的关键因素。 f关键词】内皮祖细胞：CDl33；血管生成；脐血 中国协和压科土学硕士研究t论文 第6／71页 ofcordblood Transplantation derivedendothelialcellsamelioratesmurine limbischemia Abstract The of the wasto whetherasubset 0bjective of purposeexperimentinvestigate 33+cellsincordblood endothelial CDl were todetermine cells(EPC)and progenitor the of cordbloodCDl33+cellsderivedendothelial feasibility transplanting cells(EC) in Cord CDl blood 33+cellsisolatedwith therapeuticvasculogenesis．Methods beadswerecultured in medium onfibronectinM199