以激素敏感性脂肪酶为靶点天然减肥药物初步筛选.pdfVIP

中国协和医科人学博士论文 光素酶的表达受人HsL基因启动子活性的控制，荧光素酶表达量反映人HsL 基因启动子的活性。从减肥中药方剂中选取常见的32种中药制备成用50％ 乙醇中药提取液。不同浓度待筛选中药的提取液刺激稳定转染的小鼠3T3一L1 前脂肪细胞，分别于2小时，24小时后裂解细胞，检测细胞的荧光素酶活性， 从中筛选出多种对人HsL基因启动子活性有影响的药物，选择其中的海藻， 薏米，冬瓜皮，香附，甘草和茉莉花观察不同时间、不同浓度情况下上述6 种药物提取液对小鼠3T3．L1前脂肪细胞人HsL基因启动子活性的影响。 3．中药提取液对营养型肥胖昆明小鼠体重，附睾脂肪重量和糖脂代谢的干预作 用：将昆明小鼠随机分成8组：a．基础饲料对照组；b．高脂饲料对照组；c． 小剂量薏米干预组：d．大剂量薏米干预组；e．小剂量海藻干预组：f．大剂量海 藻干预组；g．曲美(西布曲明)对照组；h．溶剂对照组。饲养4周后处死， 观察小鼠体重、附睾脂肪重量、血糖、血脂、血胰岛素和进食量的变化。 4．中药提取液对体内白色脂肪组织HSL基因表达的影响：实验结束时取小鼠附 睾脂肪组织提取RNA，用半定量逆转录PcR半定量的方法，观察中药提取液 对小鼠附睾脂肪组织HSLrnRNA的影响。 结果： 1．本研究成功克隆了含有人脂肪组织HsL基因启动子序列(．697_+53bp)的荧 稳定转染到小鼠3T3．Ll前脂肪细胞中，以此作为药物筛选的工具。 2．从32种中药中发现川芎，香附，海藻，薏米，桔梗，防风，连翘，罗汉果， 茉莉花，冬瓜皮，甘革，桑叶等中药提取液显著增强转染pGL3．HsL．Luc质 粒的小鼠3T3．L1前脂肪细胞人HsL基因启动子活性。再选择其中刺激作用 较强的海藻，薏米，冬瓜皮，香附，甘草和茉莉花进行观察。 的小鼠3T3一L1前脂肪细胞HsL基因启动子的刺激作用分别达到高峰。其中 10mg海藻／ml提取液作用细胞lh时达到峰值，最大效应为对照组的5．41倍； 同样浓度的慧米、冬瓜皮、香附、甘草和茉莉花提取液也于作用1h时达到 刺激峰值，最大效应分别为对照组的6．05倍、6．40倍、5．34倍、5．15倍和 5．31倍；上述6种中药提取液的刺激作用至少持续6小时，其中茉莉花、冬 中国协和医科大学博士论文 瓜皮和甘草在12小时时刺激作用仍存在。海藻、薏米、冬瓜皮、时草和茉 莉花提取液在2．5mg生药／m卜20mg生药／ml浓度范围内，药物的刺激作用 随着浓度的增加而增强。 3．中药提取液对营养型肥胖昆明小鼠体重和糖脂代谢的干预作用： 大小剂量薏米对高脂膳食小鼠食欲无显著影响。小剂量薏米组(O．59 生药／kg体重灌胃)小鼠空腹血清胰岛素水平和HOMA．IR较高脂饲料对照 小鼠的体重、体重的增加、空腹胰岛素水平和HoMA—IR较高脂组分别降低 胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇较高脂组分别增加了18．8％和13．6％ (PO．05)。 大剂量海藻(3．Og生药／l【g体重)灌胃降低小鼠食物摄入量21．2％ 较高脂组降低19．1％和12．8％(P0．05)，血胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇 较高脂组增加18．8％和13．6％(PO．05)。大剂量海藻组小鼠的体重、体重 增加、附睾脂肪重量、附睾脂肪重量／体重百分比、空腹血糖、胰岛素和 ％和16．3％(P均O．05)。 4．中药提取液对昆明小鼠白色脂肪组织HsLmRNA表达的影响：大剂量海藻组 曲美组附睾脂肪HsLmRNA表达较高脂组无显著改变。 结论： 简单、快速地从众多中药天然化合物中筛选出对人脂肪组织HsL基因启动子 活性有作用的药物的有力工具。 2．本研究发现下列中药：川芎、香附、海藻、薏米、桔梗、防风、连翘、罗汉 果、茉莉花、冬瓜皮、甘草、桑叶等中药提取液显著增强稳定转染 对其中的海藻，薏米，冬瓜皮，香附，甘草和茉莉花的研究证实，这6种中 中国协和医科大学博士论文 药提取液显著增加小鼠3T3．L1前脂肪细胞人脂肪组织HSL基因启动子活性。 推测海藻、薏米、冬瓜皮、香附、甘草和茉莉花可能通过兴奋脂肪细胞HsL 基因的转录而促进脂肪分解，具有潜在的临床减肥作用。