克拉霉素对体外循环肺损伤保护作用的动物实验与相关基础研究.pdf

!星丝塑型堑丝坚 一 中文摘要 一、克拉霉素对中性粒细胞凋亡的诱导作用 及对其活性影响的体外实验研究 目的：中性粒细胞在炎症反应过程中起着重要的作用。衰老的中性粒细胞以凋 亡的方式为巨噬细胞所识别并吞噬，这种细胞清除方式对炎症的控制和正常消 散都有重要的意义。研究证实，多种大环内酯类抗菌素能影响中性粒细胞的功 能，并诱导其凋亡。克拉霉素是新型14圆环大环内酯类抗菌素，其组织半衰 期长，能在周围组织形成较高的药物浓度。本研究观察克拉霉素对体外中性粒 细胞的凋亡诱导作用以及对中性粒细胞活性的影响。 养基培养48小时，实验组加入不同浓度的克拉霉素(5、10、20ug／m1)。台 盼蓝染色，镜下观察细胞存活率。分别以流式细胞仪和原位末端标记法检测培 养细胞的凋亡率。免疫组化法观察中性粒细胞凋亡相关基因蛋白Fas和bcl一2 的表达情况。提取细胞培养液的上清，分别用比色法检测上清液中乳酸脱氢 酶、髓过氧化物酶和活性氧的变化。 结果：克拉霉素明显缩短中性粒细胞的生存期，且浓度在lOu g／ml以上时， 其作用达到最大。克拉霉索组24小时中性粒细胞生存率为：5ug组为66．5 ±2．2％、10u g组为63．5±3．1％、201-1g组为63．8±3．8％，明显低于对照 组的80．2±3．1％(PO．01)。流式细胞仪检测结果显示克拉霉素组24小时凋 亡率为：1tl g组为33．7±4．9％、5ug组为48±4．9％、10u g组为52+5．4 ％、20u 末端标记法检测对照组中性粒细胞培养24小时的凋亡率为43．2+2．7％低于 ， 2 中国格萃“医科大学博士论文 较对照组明显增高。而bcl一2的表达低于对照组(PO．01)。实验组乳酸脱氢 (PO，01)。 结论：克拉霉素能促进中性粒细胞凋亡，缩短其生存期，这可能与克拉霉素影 响了凋亡相关基因Fas和bcl一2的表达有关，同时克拉霉素还能减少中性粒细 胞乳酸脱氢酶，髓过氧化物酶和活性氧的减少，减轻中性粒细胞所致的炎症反 应。 二、克拉霉素对体外循环肺损伤 保护作用的动物实验研究 目的 体外循环造成的炎症反应可导致肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤， 使术后肺功能受损。中性粒细胞在体外循环肺损伤中的作用越来越受到关注。 研究证实，多种大环内酯类抗菌素能影响中性粒细胞的功能，并诱导其凋亡。 克拉霉素是新型大环内酯类抗菌素，其组织半衰期长，能在周围组织形成较高 的药物浓度。本研究采用体外循环动物模型观察克拉霉素对体外循环所致肺损 伤的保护作用。 方法12只绵羊，体重37±5．5kg，随机分为2组，每组6只。A组为低分子 右旋锗酐肺动脉灌注组；B组为低分子右旋糖酐+克拉霉素(10mg／kg)肺动脉灌 注组。实验羊麻醉后常规建立体外循环。主动脉不阻断，经肺动脉根部灌注肺 中国协和医科大学博士论文 保护液(30M／kg)。体外循环90分钟后撤离体外循环机并维持循环稳定，于术 后24小时处死实验羊。术中观察肺血管阻力、气道峰压及动脉血气，同时抽 动脉血检测髓过氧化物酶、丙二醛、乳酸脱氢酶和细胞因子白细胞介素一6、白 细胞介素一8和肿瘤坏死因子浓度。实验结束后作支气管肺泡灌洗，留取细胞 及支气管肺泡灌洗液并作支气管肺泡灌洗液内炎症因子的测定，同时取肺组织 作光镜和电镜检查，了解肺组织形态学改变，并对切片作原位末端标记免疫组 化染色观察肺泡内渗出的中性粒细胞凋亡情况。 结果两组均有2例术后早期死亡，其余各例都在术后24小时处死。肺保护 组气道峰压低于对照组，术后O、3、24小时差异显著(PO．05)；肺保护组肺 肺保护组氧指数较对照组高，术后0、24小时差异显著(PO．05)；肺保护组 血浆髓过氧化物酶低于对照组，术后12、24小时差异显著(PO．05)；肺保护 组血浆丙二醛低于对照组，术后3小时差异显著(P0．05)：肺保护组血浆乳 酸脱氢酶低于对照组，术后3、24小时差异显著(P0．05)；肺保