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耐热大肠菌群检测 3 2 （一）多管发酵法 原理：利用大肠菌群繁殖时使乳糖发酵并能使乳糖蛋白胨培养液变黄同时产生气泡的原理。 乳糖初发酵实验 复发酵实验 样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 挑选初发酵阳性结果的发酵管（即产酸又产气），轻微振荡初发酵阳性结果的发酵管，用3mm接种环将培养物转接到EC培养液中。44.5 ℃下培养24小时 平板分离 将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，44.5℃培养18-24h，观察菌落形态。 结果报告 凡平板上有典型菌落者，则证实为耐热大肠菌群为阳性查MPN表，报告结果。 二、微生物学指标检测方法要点 耐热大肠菌群检测 3 2 （二）滤膜法 原理：将水样注入已灭菌的放有微孔滤膜的滤器中（水样量以滤膜上长菌落20～60个为宜） ，经过抽滤。细菌即被截留在滤膜上，然后将滤膜贴于合适的培养基上进行培养，44.5℃培养24h能形成特征性菌落以此来检测水中耐热大肠菌群的方法 滤膜滤器灭菌 过滤水样 滤膜培养 菌落鉴别 发酵证实 结果报告 本方法与发酵法相比优点是可以缩短阳性报告时间（24小时），具有高度重现性、使用器材少，适用于大量样品（出厂水和管网水）的检测。 二、微生物学指标检测方法要点 耐热大肠菌群检测 3 2 （三）检测中注意的事项 通过对这项工作的开展和多次实验 ,我们认为在检验过程中应注意以下几点： 1、进行耐热大肠菌群的检验方法有两种 ,一种是多管发酵法 ,另一种是滤膜法。根据水体受污染的情况 ,可采取不同的方法。这与总大肠菌群的检验方法范围是一样的。一般情况下,根据我们的水质情况，我们采取了滤膜法。这个方法简单易行 ,而且结果只需要24 h即可得出 ,同时比较准确。但是，如果水样污染严重或者是水源水时，建议采取多管发酵法，如果采取滤膜法，要做好梯度稀释，以滤膜上长菌落20～60个为宜。 2、滤膜法中所需要的 MFC固体培养基可以用市售的成品培养基配制。配制好的培养基不要进行高压灭菌 ,因玫红酸若经蒸压灭菌会分解 。配制好的MFC平板培养基应放在2℃ ～10℃ 的暗处保存，不应超过96 h ,最好现用现配，如果培养基的颜色由暗红色变成混浊的棕色就要弃去不用 。 3、为了保证培养箱内有一定的湿度可以把箱体内部底层放一个塘瓷盘 ,里边放一块湿纱布。这是防止温度高菌体干燥脱水 ,失去原菌体内的水分 ,影响其生长而采取的措施 ,若有条件可以用隔水式恒温培养箱或是恒温恒湿培养箱。 二、微生物学指标检测方法要点 大肠埃希氏菌检测 3 3 二、微生物学指标检测方法要点 1、大肠埃希氏菌概念 大肠埃希氏菌(Escherichia coli )通常称为大肠杆菌，属于埃希菌属。在此菌属中与人类生活密切相关的仅有一个种，即大肠埃希氏菌，1885年由Escherich发现，革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌。 大肠埃希氏菌检测 3 3 二、微生物学指标检测方法要点 2、大肠埃希氏菌的来源 大肠埃希氏菌主要附生在人或动物的肠道里，为正常菌群，少数的大肠杆菌具有毒性，可引起疾病。大肠埃希氏菌又称大肠杆菌或普通大肠杆菌，它是人和混血动物肠道中的正常寄生细菌。 作为粪便污染的最佳指示菌，大肠埃希氏菌检出的意义最大，其次是粪大肠菌群，总大肠菌群的检测意义略差一些 。因此，大肠埃希氏菌是粪便污染最有意义的指示菌，已被世界上许多组织、国家和地区使用。新国标中加入大肠埃希氏菌指标，限值为100mL不得检出大肠埃希氏菌。并注明：若检出总大肠菌群，必须进行耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌检测。若水样中检出耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌，则说明水质可能受到严重污染，必须采取相应措施。 3、大肠埃希氏菌的检测意义 大肠埃希氏菌检测 3 3 二、微生物学指标检测方法要点 （一）多管发酵法 大肠埃希氏菌检测 3 3 大肠埃希氏菌的测定，GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》中规定有三种方法：发酵法、滤膜法、酶底物法。一般来说，发酵法适用于饮用水、水源水尤其是浊度较高的水样，滤膜法适用于饮用水及浊度低的水源水水样。 接种 培养 结果观察报告 将总大肠菌群多管发酵法初发酵产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测。用烧灼灭菌的金属接种环或无菌棉签将上述试管中的液体接种到EC-MUG管中。 将已接种的EC-MUG管在培养箱或恒温水浴中44.5 ℃±0.5 ℃培养24±2h 将培养后的EC-MUG 管在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外灯照射，如果有蓝色荧光