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微波提取白苏子叶子中水溶性总黄酮类物质的条件研究
邵萍 何金哲 孙培龙 赵培程
浙江工业大学生物与环境工程学院,中国杭州310014
摘要: 白苏子是一种传统的中药。利用微波萃取剂快速从白苏子叶快速提取黄酮类化合物。利用单因素和Box-Behnken实验设计优化了微波萃取工艺中的几个重要影响因素(微波功率、提取周期,溶剂液料比、辐照时间和pH值)。响应面方法分析表明实验值和预测值之间良好的的相关性。通过实验可以发现与实验值具有非常好的一致性且最有效的参数是料液比。模型的相关系数(Radj2)模型是93.45%。在概率 (P 0.001)范围内展示了一个非常有意义的回归模型。在液料比1:16.5,辐射时间23min, pH 8.4,微波功率600 W下得到微波提取黄酮的最大提取率6.07mg/g,略低于索氏提取法,但高于用水为溶剂的加热回流提取法。提取物表现出对DPPH自由基的高清除作用。随着溶液浓度从0.10mg/mL增加到0.80mg/mL,清除率达到62.3%。
关键词:白苏子;黄酮类;微波辅助提取;响应面设计;清除率;DPPH自由基
1引言
白苏子是一种具有多种重要效用且主要分布在日本,韩国,和中国的唇形科一年生草本植物(Longvah and Deosthale. 1998)。白苏子的叶子是一种传统的中草药, 几个世纪以来一直被用于治疗各种疾病,包括抑郁症,肿瘤,细菌和真菌感染,过敏和一些肠道疾病。白苏子叶子的主要有效成分包括黄酮类、皂苷、多糖、氨基酸、微量元素等(Chen et al. 2003; Zhang 2007)。最近的研究表明白苏子叶子中的黄酮类化合物具有很强的抗氧化活性和药理性质。
黄酮类化合物的其他提取方法包括索氏提取法、超声波辅助提取法和热回流提取法(Kamaljit, et al. 2008; Charalampos and Michael 2008)。甲醇通常被用作萃取溶剂。在样品制备中有机溶剂的大量使用和不断增长的废液处置成本使人们对于更好、环境更友好的提取方法的需求也不断攀升。这使得水成了一种可替代的溶剂选择,尤其是它的低成本,强极性和无毒的特点(Ho et al. 2008)。使用水作为酚类化合物的提取溶剂已经被提出来了。
微波能是一种导致分子离子的迁移和旋转运动的非电离辐射(Chen et al. 2008; Gu et al. 2008)。微波辅助提取植物次生代谢物以见相关报导(Chattip et al. 2008; Guo et al. 2001; Chen et al. 2007)。然而,关于利用微波提取从白苏子中提取黄酮类化合物直到现在还鲜有报道。微波提取相比于传统的提取技术的主要优点是大大减少了时间和溶剂的使用量。
响应面分析是一种使用定量数据设计适当的实验,以确定或同时解决多元方程的一种统计方法(Jiang et al. 2006)。在这项研究中,微波提取被用来从白苏子中提取黄酮类化合物。实验从微波功率、提取周期、微波时间、溶剂液料比和pH值对黄酮提取率的影响进行探究。响应面方法被用于构建一个黄酮提取率和这些独立的因素之间关系的模型,来优化黄酮得提取条件。
2材料和方法
2.1材料和试剂
白苏子2008年5月购于杭州同仁堂集团有限公司。用地面式粉碎机切割以获得相同质量的药物粉末,然后过10目筛。粉末在50°C下干燥至恒重,并在使用前充分混合。
芦丁,购自西格玛化工公司(St. Louis, MO)。所有其他化学试剂均为分析纯。
2.2微波提取方法
在微波提取实验过程中所用的微波设备(Model NJL07-3, Jieque Microwave equipment Co., Ltd., China)根据液料比投入相应的40 g白苏子树叶药物粉末于不同提取条件下的提取容器中。提取结束后,将容器冷却至室温后再打开。然后,将提取物通过真空干燥。
使用单因素和Box-Behnken实验设计,对微波提取工艺的几个主要参数(微波功率、提取周期,溶剂液料比、辐照时间和pH值)进行优化处理。
2.3实验设计
首先,进行单因素实验分析微波功率和提取周期两个因素对从白苏子叶中微波提取黄酮类化合物提取率的影响。其次,使用Box-Behnken执行设计和开发一个模型,以优化液固比、辐照时间和pH值等提取工艺参数。针对白苏子叶子中的碱性黄酮类化合物,选择pH值的范围从7到9。pH值越大,可以促进酚类物质的氧化。最后,比较索氏提取法和响应曲面法的黄酮类化合物的提取率。
2.4响应曲面法设计
响应曲面设计被用于研究以黄酮类化合物提取率为纵坐标的Y。独立变量X1,X2,X3分别代表液固比,提取时间和pH值。三个重复实验的中心设置成坐标原点(0,0,0),以减少实验的允许纯误差。实验设
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