一抗二抗显色液蛋白纯化.docVIP

鼠抗6xHis标签单抗 免疫原：PAX6转录因子连接的Histidine标签。 品种：对所有His标签都起作用。 活性：对细菌提取物进行Western blotting时，抗体不会和内源性产物作用，但是会和昆虫或哺乳动物细胞提取物反应。 推荐稀释度：WB 1/500-1/100使用的最佳稀释度还需使用者通过实验进一步确定。 相关性：在很多重组蛋白中用H-H-H-H-H-H基序便于纯化，His标签无论是融合于氨基端或羧基端都可以被抗体识别。 细胞定位：依赖于带有六聚组氨酸融合的蛋白的位置。 产品介绍：ab15149识别H-H-H-H-H-H基序。细菌，酵母或昆虫细胞表达蛋白，纯化，再用抗体去追踪。 抗体类型：IgG1。 纯化：用蛋白G纯化。 Buffer：保存：0.1%叠氮钠。 成分：PBS,Ph 7.2 本产品含剧毒成分。 提纯：用蛋白G亲和层析纯化组织培养液。 浓度：1.00mg/ml. 储存条件：4度保存1-2周；分装保存于-20度或-80度；避免反复冻融。 液体产品使用前请离心，否则一些产品粘在管壁造成损失。 AP标记的羊抗鼠IgG多克隆抗体（二抗） 免疫原：鼠所有的IgG分子。 推荐稀释度：可用于免疫印迹（western或dot blot），ELISA，或免疫组化等。 相关性：IgG是人血清中比较丰富的蛋白，成人的血液中浓度大约为8-17mg/ml. IgG对抵御微生物很重要，是B细胞介导的适应性免疫产生的。IgG有两个重要的功能：结合抗原引起适应性免疫，募集其他的细胞和分子破坏抗原。 偶联：AP(牛肠)（分子量：140000道尔顿） 储存Buffer：0.01M磷酸钠，0.25M Nacl，pH7.6，0.05%叠氮钠，0.01%Thimerisol，15mg/mlBSA. 纯化：单一并特异性抗鼠IgG抗血清通过免疫亲和层析纯化。 浓度：1.00mg/ml 储存条件：4度（禁止冻存）。 液体产品使用前请离心，否则一些产品粘在管壁造成损失。 NBT/BCIP 介绍：NBT/BCIP是AP的底物，形成沉淀产物，可用于免疫印迹，免疫组化和原位杂交。 产品信息：1.用前摇匀，直接加入，直到显色。 2.加入levamisole至终浓度为1mM，可减少内生磷酸酶活性。 免疫组化步骤： 用血清或封闭液封闭组织的非特异性位点，室温，30min，湿盒中。弃封闭液。 加入一抗，室温，30min，湿盒中。 用TBS洗，每次3min。 加入AP酶标二抗，室温，30min，湿盒中。 用TBS洗，每次3min。 摇匀NBT/BCIP，加入，直到显色。 用水漂洗。 Western blotting 步骤： 在摇床上封闭液封闭，室温，30min。 加入一抗，1h，在摇床上摇。 用TBS洗膜。 加入AP酶标二抗，室温，1h，在摇床上摇。 用TBS洗膜。 摇匀NBT/BCIP，加入，孵育5-15min或直到显色。 用水漂洗。 6xHis融合蛋白纯化试剂盒 说明书：6xHis融合蛋白纯化试剂盒能够纯化16次，每次250ml培养基。 产品成分： 细菌蛋白提取试剂：165ml，包括：20mM Tris缓冲液，pH 7.5，和专有的添加剂； 镍螯合的琼脂糖：8ml离子交换树脂，包括：镍螯合iminodiacetic acid（IDA），IDA与4%琼脂糖柱子共价结合； 洗涤缓冲液：40ml，包括：50 mM Tris, 300 mM NaCl, 25 mM imidazole（咪唑）, 10% glycerol（甘油）, pH 6.8； 洗脱缓冲液：45 ml, 包括：50 mM Tris, 300 mM NaCl, 200 mM imidazole, 10% glycerol, pH 6.8； 柱子：16个，含0.45um醋酸纤维素薄膜。 收集柱：80个。 储存条件：B-PER Reagent，柱子，收集柱室温保存；其他成分4度保存。 产品介绍：Thermo Scientific B-PER 6xHis Fusion Protein Spin Purification Kit能快速纯化细菌中与His标签融合的蛋白。用B-PER Bacterial Protein Extraction Reagent从菌体中提取可溶蛋白，在spin-cup中加入0.5ml镍螯合的琼脂糖，通过immobilized metal affinity chromatography (IMAC)纯化His标签蛋白。 B-PER Reagent 能高效的提取可溶重组蛋白，能够特异性的，最大量的使His标签蛋白结合于镍螯合的琼脂糖上。然后，洗去未结合的蛋白，再洗脱，回收。 产物的产量及纯度依赖于蛋白的表达量，构象，溶解度。用本试剂盒可以从2