动物生物制品的制备分析.ppt

完美佐剂的标准 无致癌性; 无毒性; 纯度高; 有一定的吸附力; 在动物体内能被降解、吸收; 不含与动物有交叉反应的抗原物质; 不诱发自身过敏反应; 稳定,储存1 年以上不分解、不变质 佐剂的类型 1、颗粒性佐剂 盐类佐剂 油水乳剂佐剂 蜂胶佐剂 脂质体佐剂 免疫剌激复合物(ISCOM)佐剂 其它：MF59佐剂、微囊化佐剂、硬脂酰酪氨酸佐剂、γ-菊粉等 佐剂的类型 2、可溶性佐剂 肽类： MDP 表面活性分子类： TDM 核酸及其衍生物类： CpG DNA, CpG-ODN 含硫复合物类： 左旋咪唑 碳水化合物高分子类：多糖和DEAE-葡聚糖等 细胞因子类： IL- γ-IFN 脂质分体类： 脂多糖，Vit.A\E 其他： 蛋白毒素如CT、PT、TT 常用佐剂 1、铝盐类佐剂 氢氧化铝胶 明矾 磷酸三钙 氢氧化铝成本低廉,使用方便、无毒,是胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原的良好免疫佐剂。 主要的不足之处是铝盐佐剂仅能诱导、激发体液免疫。 鸡胚接种后的检查与收获病毒 弃去接种24小时内死亡的胚蛋，24小时后死亡的胚蛋随时取出，放4～8℃冷冻4～24小时，以备收获材料。 收获含病毒的尿囊液、羊水、绒毛尿囊膜、卵黄囊、胚体 四、培养病毒的细胞类型及其培养方法 细胞类型 1、原代细胞 (2-3代) 2、二倍体细胞株 (有限性，10-50代) 3、传代细胞 (恶性转化细胞系、转化细胞系) 细胞培养方法 1、静置培养 2、转动培养 3、悬 浮培养 4、微载体培养 5、中空纤维细胞培养 6、微囊化细胞培养 组织培养细胞 上皮细胞 上皮样细胞 纤维原细胞 上皮细胞------腺病毒 正常 感染初期 感染后期 上皮细胞(epithelial cells) –呼吸道合胞病毒( respiratory syncytial virus) 感染前 感染后 纤维原细胞-------单纯疱疹病毒 正常 感染初期 感染后期 纤维原细胞-----脊髓灰质炎病毒 正常 感染初期 感染后期 三、实验室细胞培养技术 培养细胞用器材及其处理 一次性的使用方便 酸碱处理、清洁、干燥、消毒 细胞培养液和贮存液 1、平衡盐溶液(BSS)和磷酸缓冲盐溶液(PBS) 2、胰蛋白酶-EDTA溶液 3．碳酸氢钠溶液 4．胰蛋白酶溶液 5．水解乳蛋白溶液 6．胰蛋白胨磷酸盐肉汤（TPB） 7．Eagle’s营养液 8．199营养液 9. RPMI－1640营养液 10. 犊牛血清、抗生素 细胞培养的细胞制备 1、鸡胚成纤维细胞(CEF) 10天龄鸡胚→去头、脚、翅、内脏→剪碎→洗3次→加胰酶水浴消化→洗3次→加入生长液过滤→离心→加犊牛血清、营养液分装培养瓶→24~48小时后成间层细胞 2．传代细胞的培养： 次代细胞和传代细胞系的培养方法基本相同。 良好单层的细胞→用无钙镁的磷酸平衡盐水洗两次→胰酶消化→加生长液分装(1：3~4) 细胞的保存 单层的细胞培养→更换新的营养液→胰酶消化→收集细胞→细胞冷冻保护液→分装干lml安瓿→0.05％美蓝溶液中，4℃30min →一50～一70℃ →液氮罐内贮存数年 细胞的复苏： 将安瓿自液氮罐取出后立即放入37～40℃温水中，在lmin之内使细胞融化→吸出细胞悬液→加入新的生长液，稀释分装培养瓶→贴壁后换液一次→至形成细胞单层。 细胞的运输： 留少量生长液能覆盖单层，防细胞干燥，防液体振荡冲脱细胞。 病毒的接种与检查 单层细胞培养→弃生长液→洗一次细胞面→接种待检病料或病毒液→ 吸附30～60min →弃接种液加入维持液→细胞病变→鉴定 病毒的蚀（空）斑技术 病毒接种于细胞上→覆盖一层琼脂→形成局限性病灶→蚀斑 多用于病毒克隆化及病毒含量的滴定 细胞培养污染问题 细菌污染 真菌污染 支原体污染 病毒污染 来源血清的原虫污染 五、以动物体增值病毒的技术 用途 病毒的致病力、 致病机理 免疫应答方面 制造疫苗 抗血清等 接种技术 脑内接种法 皮内接种法 皮下接种法 静脉接种法 腹腔接种法 六、工业化大规模生产病毒的方法 1．多表面细胞培养系统(多层玻璃板) 2．微载体细胞培养系统 3．气升悬浮细胞培养系统 4．过滤培养 5．大规模生产过程中的计算机自动控制系统 第二章 第六节 灭活剂、保护剂与免疫佐剂 一、 灭活剂 灭活 灭活—指破坏微生物的生物活性、繁殖能力和致病性，但不影响其免疫原性。 微生物灭活、血清灭活、毒素灭活… 灭活的主要方法