胚胎发育学课件.pptVIP

胚胎学实验部分 指导教师：董巍 报告人：薛峪霖 2006-05-30 胚胎学实验内容 了解切片制作过程 观察斑马鱼、蛙、鸡胚活体及切片 制作2Dpf鸡胚整装片 一、切片的制作 1、切片的种类 取材 切片、涂片、铺片、压片、磨片等； 切片 石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片； 连续切片、整装片 2、切片的制作 取材 固定 （浸蜡、包埋） 切片 染色 透明 封固等 next 固定液 单一固定液 复合固定液—长处突出，短处抵消 染色液 染色方法 常用染色方法 Mallory’s三色染色 铁矾苏木精染色 尼氏体染色 镀银法 ——上皮界限、网状纤维、神经细胞全貌（Golgi简易法）、神经细胞（石蜡切片法） 镀金法 ——运动终板 特殊组分染色法 Feulgen反应—示DNA Pyronine法—示RNA PAS法—糖元 碱性磷酸酶Gomoni法（钴） 透明剂 二甲苯（XYL） 甲苯 苯 氯仿 香柏油 二、切片观察 观察重点一 早期卵裂—斑马鱼 ＆ 蛙胚 未受精卵 ? 合子期胚胎?分裂期胚胎? 囊胚 （ ?原肠胚? 器官形成期）； 原肠化—蛙胚 背唇、腹唇、瓶状细胞（早）； 原肠腔vs囊胚腔（早中晚）； 卵黄栓 （晚）； 神经胚—蛙胚 神经板、脊索、原肠腔、中胚层； 神经管、神经嵴、（体腔）、外胚层； 器官形成—鸡胚 附：1、3mm蛙胚连续切片； 2、鸡胚原条期切片。 观察重点二：鸡胚发育过程整装片及切片 1、未孵化鸡胚（处于囊胚期）切片 2、原条期（孵育16小时）切片 明区，暗区，原条，原结，原窝 3、19小时鸡胚整装片 4、孵育1天的鸡胚整装片（四个体节） 明区，暗区，前羊膜，神经褶，四对体节， 脊索，退缩的原条 5、33小时鸡胚整装片 前脑，视泡，中脑，菱脑，心脏，体节， 神经管 6、孵育3天鸡胚整装片 端脑，间脑，中脑，后脑，听泡，尿囊，心脏， 尾，体节 观察重点三：鸡胚活体标本的形态结构特征 2 Dpf鸡胚 气室、卵壳膜、胚盘等 7～8 Dpf鸡胚 1、观察四种胎膜(卵黄囊、羊膜、尿囊、绒毛膜) ，胚胎的外形，卵黄囊是否完全包住卵黄？尿囊的大小？ 2、羊膜大小。 3、眼睛、喙、四肢、指和趾的分化。 三、整装片制作 实验材料、仪器及药品 受精的鸡蛋(白来航——2Dpf ） 恒温箱、检卵灯、温度计、湿度计； 染色缸、药匙、镊子、吸管、废液缸、解剖剪、玻璃皿、 0.9％生理盐水、卡氏固定剂、 95％酒精、酒精洋红、 100％酒精、甘油、载玻片、盖玻片等 2Dpf鸡胚整装片制作流程 上 下 临时制片 取材 →0.9%的生理盐水冲洗 →卡氏固定液，5’~10’ →95％酒精，2’ →酒精洋红，20’~30’ →95％酒精，2分钟 →100％酒精，2’ (*2) →100％甘油封片 永久制片 →1：1的100％（酒精：二甲苯）10’ →二甲苯10’ →树胶封片 附：1、蛙卵的获得2、鸡的孵化 斑马鱼胚胎早期发育图谱 爪蟾的人工受精 人工受精—催青 1、激素催青—绒毛膜促性腺激素（HCG）；12小时 2、垂体提取液催青 步骤 1、区分爪蟾的雌雄—雌：大； 雄：婚爪垫； 2、催青、抱对 ； 3、精子悬浮液制备—处死 4、取卵与人工受精—挤压 5、体外受精 蛙胚早期卵裂 蛙原肠胚 蛙神经胚 鸡卵的人工孵育 选蛋 孵化前消毒—0.01%高锰酸钾 、水温40℃ ，擦拭 孵化 ——21天 1、 温度—37.8℃（36.5℃～38.5℃） 2 、湿度—40～70% 3 、通风 4 、翻蛋 —30～40次 vs 3～5次 /天 5 、晾蛋 6 、照蛋 5～6天 —无精蛋、裂纹蛋； 11天 —死胚蛋 ； 21天—死胚蛋、破壳蛋 8Dpf鸡胚—胚外结构 鸡蛋的结构 鸡的胚外结构( 下次选择另一幅图吧，4张的