生物化学练习题3(生科08).docVIP

本资料来源于生科07师兄师姐 第十四章 核酸的物理化学性质 核酸的糖苷键和磷酸二酯键可被酸、碱和酶水解，产生碱基、核苷、核苷酸和寡核苷酸。酸水解时，糖苷键比磷酸酯键易于水解；嘌呤碱的糖苷键比嘧啶的糖苷键易于水解；嘌呤碱与脱氧核糖的糖苷键最不稳定。 RNA 易被稀碱水解，产生 2 —和 3 —核苷酸， DNA 对碱比较稳定。细胞内有各种核酸酶可以分解核酸。限制性内切酶是基因工程的重要工具酶。 核酸的碱基和磷酸基均能解离因此核酸具有酸碱性质。碱基环中的氮具有结合和释放质子的能力。核苷和核苷酸的碱基与游离碱基的解离性质相近，它们是兼性离子。核酸中的磷酸基只有一级解离。 DNA 的酸碱变性使酸碱滴定曲线不可逆。 核酸的碱基具有共轭双键，因而有紫外吸收的性质。各种碱基、核苷和核苷酸的吸收光谱略有区别。核酸的紫外吸收峰在 260nm 附近，可用于测定核酸。根据 260nm 与 280nm 的吸光度（ A ）可判断核酸纯度。天然 DNA 的ε（ P ）为 6600 ， RNA 为，发生变性和降解时，ε（ P ）值会升高，以此可鉴别核酸制剂的质变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，但共价健并未断裂。引起变性的因素很多，升高温度、过酸、过碱、剂都能造成核酸变性。核酸变性时物理化学性质将发生改变。热变性一半时的温度称为熔点或变性温度，以 Tm 表示。 DNA 的 G+C 含量影响 Tm 值。根据经验公式 xG+C =(Tm － 69.3) × 2.44 可以由 DNA 的 Tm 值计算 G+C 含量。或由 G+C 含量计算 Tm 值。 变性 DNA 在适当条件下可以复性，物化性质得到恢复。复性快慢以 Cot 1/2 来表示。用不同来源 DNA 进行退火，得到杂交分子。也可以由 DNA 链与互补 RNA 链得到杂交分子。分子杂交是进行分子生物学研究的重要方法。 DNA变性不涉及到其一级结构的改变nm处的光吸收（A260nm）增强的现象称为增色效应或高色效应。这主要是核酸变性后，碱基的共轭双键更多地暴露的原故。 二、是非题 核酸样品的纯度可以根据样品的O.D260/O.D280 的比值判断，纯的DNA 样品O.D260/O.D280=1.8，纯的RNA 样品O.D260/O.D280=2.0。[对] 用碱水解核酸时，可以得到2’和3’-核苷酸的混合物。[对] DNA 的Tm 值随（A+T）/（G+C）比值的增加而增加 [错] DNA复性时会产生增色效应 [错] DNA的变性通常是爆发式的，在一个很窄的温度范围内发生[对] 第十五章 核酸的研究方法 ???? 核酸研究的首要方法是核酸的分离和测定。目前分离 DNA 最重要的方法有 3 个：一是用盐抽提，用苯酚和氯仿除去蛋白质。二是用广谱蛋白酶在 SDS 存在下保温消化细胞悬液，再用苯酚的氯仿去蛋白，用 Rnase 除去少量的 RNA 。三是用氯化铯密度梯度离心法分离纯化制备 RNA 要防止 Rnase 的降解。①器皿要高温处理或用 DEPC 除去 Rnase 。②破碎细胞的同时使蛋白质变性。③ RNA 反应体系中加 Rnase 抑制剂。目前常用的 RNA 分离方法有两个：其一 用酸性盐 / 苯酚 / 氯仿抽提。其二，用盐 / 氯化铯密度梯度离心。分离 poly(A) + mRNA 可用寡聚（ dT ） n 亲和层析法核酸的测定常用紫外分光光度法、定磷法和定糖法。测定生物样品中的核酸需要预先处理提取出核酸或其成分再作测定。核酸的超速离心是研究核酸的重要方法。常用的是密度梯度离心法。可用来测定核酸密度、测定 G+C 含量和研究核酸的构象。核酸的凝胶电泳是最常用的核酸研究方法。通常用的是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。核酸的测定常用紫外分光光度法、定磷法和定糖法。测定生物样品中的核酸需要预先处理提取出核酸或其成分再作测定。核酸的超速离心是研究核酸的重要方法。常用的是密度梯度离心法。可用来测定核酸密度、测定 G+C 含量和研究核酸的构象。核酸的凝胶电泳是最常用的核酸研究方法。通常用的是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。。 快速测定核酸序列有许多方法。 Sanger 最初提出加减法测定 DNA 序列，后又改进为终止法。 Maxan 和 Gilbert 提出化学法测定 DNA 序列。 RNA 序列测定方法与 DNA 测序法的原理是一样的。 DNA 的聚合酶链反应（ PCR ）是应用最广泛的生物技术。它的基本步骤为：（ 1 ）设计引物。（ 2 ）优化反应体系。（ 3 ）选择热循环温度。（ 4 ）鉴定扩增产。 PCR 技术在生物学、医学、法医等方面都有广泛的应用。 聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法。典