甲醇在缓冲液的作用.docVIP

? 在印迹转移中，转膜成功与否，直接关系到整个Western Blotting 的成败：其中转移缓冲液，膜的选择至关重要。要使蛋白质组分能有效地从凝胶转移到固相纸膜上,缓冲液的pH很重要。有些分子量并不是很大的蛋白质区带，即使延长电转移时间也不能从凝胶转移到固相纸膜上。这是由于蛋白质在转移缓冲液中恰好处于等电点状态所造成的，因此应适当改变转移缓冲液的pH以利于转膜。转移缓冲液中都含有适量的甲醇，对于分子量较小的蛋白质，甲醇能促进它们固定在固相纸膜上，但对于大分子量蛋白质，尤其是碱性蛋白质，在转移缓冲液中是不宜加入甲醇的。因甲醇使凝胶孔径变小，不利于分子量较大的蛋白质从凝胶中转移出。由于甲醇能将结合在碱性蛋白质上面的SDS解离出来，而使其带正电或呈电中性，蛋白质也就更难从凝胶中转移出。此外，膜的选择也很重要.硝酸纤维素NC膜、聚偏二氟乙烯PVDF膜，重氮化膜和阳离子尼龙膜为最常用的膜，硝酸纤维素NC膜使用得最普遍。因其价格便宜，使用方便，吸附蛋白质容量大，可用各种染色方法进行检测。它的缺点是：与蛋白的结合为非共价性，膜干燥后很脆，易碎。重氮化膜则与蛋白形成共价结合，有较好的机械强度，但它只能在那些没有游离氨基的凝胶缓冲液中使用。阳离子尼龙膜与蛋白是通过离子键结合的，其结合容量很大，尤其对分子量较小的蛋白质结合特别有效。它有极好的机械强度，在冲洗和干燥中膜的大小不发生改变。PVDF膜是用来吸附从各种凝胶中转印的蛋白质的最佳用膜。这种疏水膜呈均一控制的孔结构，具有极强的吸附生物分子的能力。与硝酸纤维素膜相比，Immobilon-P膜具有易于操作，染色性能好、抗溶剂能力强和信噪比高的特点，提高了检测的灵敏度。其开放的孔结构使其容易接近被吸收的蛋白质，并去除背景上没有吸附的探针。可以说，它是免疫检测理想的印迹膜。此外，膜的孔径的大小也是需要考虑的重要因素。对于分子量大于20kD的蛋白质，需要选择0.45um的膜，分子量小于20kD，需要选择0.2um的膜。分子量小于7kD，需要选择0.2um的膜。有的蛋白质由于分子量太大，而很难转膜，针对这种情况，PIERCE专门推出了在胶上做Blotting的试剂盒。 目录号 产品名称 规格 价格 RMB 备注 88013 NC膜，0.2um，7.9cm×10.5cm 15/pkg 980 详细信息 88014 NC膜，0.45um，7.9cm×10.5cm 15/pkg 980 88024 NC膜，0.2um，8cm×8cm 15/pkg 1264 88025 NC膜，0.45um，8cm×8cm 15/pkg 1294 88018 NC膜，0.45um，33cm×3m(＝87×7.9cm×10.5cm或52×11.5cm×12.5cm) 1roll 4407 77012 NC膜，0.2um，8cm×12cm 25/pkg 3236 77010 NC膜，0.45um，8cm×12cm 25/pkg 3236 22860 Low-Fluorescence PVDF Transfer Membrane, 0.2 μm Membrane 7 cm x 8.4 cm 10/pkg 1092 88518 PVDF膜，0.45um，26.5 cm x 3.75 m 1 roll 3683 88585 PVDF膜，0.45um，10 cm x 10 cm sheet 10 960 28379 BupH Tris Buffered Saline Packs Each pack yields 500 ml of 25 mM Tris, 0.15 M NaCl,pH 7.2 when dissolved in 500 ml distilled water (5 liters total). 10 packs 817 88600 Western Blotting Filter Paper 8 cm x 10.5 cm sheet 100 sheets/ box 586 24580 MemCode?NC膜可逆染色试剂 / 1372 24585 MemCode?PVDF膜可逆染色试剂 / 1568 28380 Tris－甘氨酸转移缓冲液 / 1633 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 各地经销商名录 ? ? ? 蛋白转移膜，滤纸及转膜缓冲液 酶标二抗 免疫印迹封闭液 Miser 抗体节约缓冲液 抗体 抗体芯片 Eraser－IT?底片背景去除试剂 Restore? Western Blot抗体洗脱缓冲液