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巴斯德
法国,微生物学家
失败的原因:发酵物中混入了杂菌
实验室培养微生物的目的
1、为培养的微生物提供适合的营养和环境条件;
2、防止其他微生物污染。
液体培养基
固体培养基
据物理性质分
天然培养基
合成培养基
据化学成分分
选择培养基
鉴别培养基
据用途分
2.类型及应用:
(一)培养基
常用于工业生产
用于微生物的分离、鉴定、计数
加琼脂
常用于工业生产
常用于分类、鉴定
培养、分离出特定微生物
鉴别不同种类的微生物
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。
根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成。
人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
液体培养基:
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
由单个微生物繁殖而来是肉眼可见的子细胞生长群体叫菌落。
菌落——
菌落的大小、形状、边缘状况、质地、光泽、颜色及透明度等是微生物分类、鉴定的重要依据。
选择培养基
应用
加入青霉素
加入高浓度食盐
不加氮源
纤维素或石蜡油为唯一碳源
不加含碳有机物的无碳培养基
抑制细菌和放线菌
分离酵母菌、霉菌等真菌
分离金黄色葡萄球菌
分离固氮菌
分离自养型微生物
分离出分解纤维素或石蜡油的微生物
鉴别培养基
应用
加入伊红-美蓝
加入淀粉
鉴别水中大肠杆菌(带金属光泽深紫色菌落)
鉴别产淀粉酶菌株 (产生淀粉水解圈)
碳源
氮源
无机盐
水
(一)培养基
3.营养要素
还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
如:生长因子(即细菌生长必需,而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、碱基)
养物
概念
作用
来源
碳
源
能提供
所需碳
元素的
物质
①用于合成微生物细胞结构的物质和代谢产物
②异养微生物的主要能源
无机化合物:CO2、NaHCO3
有机化合物:糖类、
脂肪酸、花生粉饼、石油等
氮
源
能提供所需氮元素的物质
主要用于合成、蛋白质、核酸以及含氮代谢产物
无机化合物:N2、NH3、铵盐、
硝酸盐;有机化
合物:尿素、牛肉膏、蛋白胨
生长
因子
生长必不可少的微量有机物
一般是酶和核酸组成成分
维生素、氨基酸、碱基
自养微生物
异养微生物
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
将上述物质溶解后,用蒸馏水定容至1000ml。
配方中的各成分为微生物提供了哪些营养?
(一)培养基
3.营养要素:
碳源、氮源、 磷酸盐和维生素
氮源和维生素
无机盐
H、O
对异养微生物来说,含C、N的化合物既是碳源,也是氮源。即有些化合物作为营养要素成分时并非单一方面的作用。
并非所有微生物都需添加特殊营养物质
硝化细菌的化能合成作用过程:2NH3+O2—硝化细菌—2HNO2+2H2O+能量2HNO2+O2—硝化细菌—2HNO3+能量CO2+H2O—能量—(CH2O)+O2从中可以看出,氮源来自NH3,碳源来自CO2,能量是转换反应产生的
1.获得纯净培养物的关键:
防止外来杂菌的入侵
2.无菌技术包括:
对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒;
用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌;
为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行;
实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触。
(二)无菌技术
消毒
使用较为温和的物理或化学方法,杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。
3.消毒与灭菌
灭菌
使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。
理化因素的作用强度
消灭微生物的数量
芽孢和孢子能否被消灭
(1)定义
区别:
1、煮沸消毒法:
100℃煮沸5-6min,日常生活中广泛应用
2、巴氏消毒法:
70-75 ℃煮30min或80℃煮15min,牛奶、啤酒等不宜进行高温消毒的
3、化学药剂消毒法:
75%酒精擦拭双手、氯气消毒水源、石炭酸、煤酚皂溶液等
4、紫外线消毒法:
用于接种室空气消毒……
(2)消毒的方法:
3.消毒与灭菌
1、灼烧灭菌:
用于微生物接种工具,如:接种环、接种针或其他金属用具等,以及接种过程中试管口或锥形瓶口的灭菌。
(3)灭菌的方法:
3.消毒与灭菌
2、干热灭菌:
160-170 ℃下加热1-2h。
用于玻璃器皿、金属用具等能耐高温、需保持干燥的物品。
3、高压蒸气灭菌:
100kPa、121 ℃下维持
15-30min.
广泛用于培养基及多种器材、物品。
(3)灭菌的方法:
3.消毒与灭菌
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌,它可以
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