探究Viperin 对HBV感染小鼠的作用。.docVIP

重庆医科大学 大学生科学研究与创新实验项目 申请书 项目名称：Viperin在HBV感染小鼠中的申请者： 指导教师： 单位： 电话： 申请日期：2016年3月日 研究项目 项目名称 AAV-1.3建立乙肝小鼠模型的抗病毒作用，以及Viperin与HBV的相互关系 所属学科 申请金额 元 起止时间 20年月至年月 项目性质 学生自选研究课题（选其一） 科研小组成员 姓名 性别 年级 电话及电子邮箱 张浪生 男 014级3368383014 504872558@ 指导教师 研究内容和 意义简介(400~50字) 肝炎病毒感染极大多数都会发展成为慢性乙型肝炎，慢Viperin（Virusinhibitoryprotein,endoplasmicreticulumassociated,interferoninducible）的抗病毒机制有了较为深入的了解，基于大量的实验研究，本研究尝试探究Viperin与HBV之间的基本关系，据文献，在与宿主相互作用的长期进化过程中,某些病毒能够抑制细胞内Viperin的表达,逃逸其抗病毒功能，本实验试图通过动物实验的方式检测其感染HBV小鼠的viperin表达，另一方面，通过rAAV8-1.3HBV建立乙肝感染小鼠模型，通过检测相关的HBVDNA参数和(PCR手段)检测建模是否成功，根据目前国内外的研究，尽管Viperin与其他相关病毒的作用机理有了较为深入的认识，但在Viperin和HBV之间相互作用依旧是较为空白的一块，因此本研究可以一定程度上弥补相应的空白并且可以为乙肝病毒感染免疫机制有更加深入的了解。 一、立论依据(项目的研究意义和国内外研究现状分析，附参考文献) HBV 乙型肝炎病毒感染大多数都会发展成为慢性乙型肝炎，慢 Viperin（抗病毒免疫因子） 毒感染宿主后，病毒核酸和蛋白质会激发机体免疫保护系统。机体先天性免疫保护系统作为抗病毒感染的第一道防线，会激活细胞内信号通路释放多种细胞因子，以抑制病毒的增殖，干扰素（Inter-feron，IFN）作为其中重要的细胞因子之一，在机体细胞与病毒的相互作用中发挥着重要作用。干扰素分为三种类型：Ｉ型干扰素（IFN-α，β，ω，ε，κ），ＩＩ型干扰素（IFN-γ）和ＩＩＩ型干扰素（IFN-λ）。干扰素通过结合细胞表面特异受体，诱导上千种干扰素刺激基因（IFN-SｔｉMｕLａｔeDｇeNe，ＩSＧ）的表达，其中不少具有抗病毒活性，被称为先天免疫因子。多年来，尽管人们不断探索干扰素在宿主与病毒相互作用中的机制，努力揭示先天免疫因子的作用机理，但迄今仅对少数分子的抗病毒机制有较深入了解，Viperin即为其中之一［２］。Viperin在细胞内的本底表达水平较低，但被多种物质诱导后表达显著增高，如Ｉ型干扰素、多种病毒、LPS和POLY（Ｉ：C）等。Viperin被诱导表达可概括为干扰素依赖和干扰素非依赖两种通路。 Viperin作为一种能被干扰素诱导的抗病毒蛋白，对多种病毒具有抑制作用。如LCMV、SEV［、ＪEV［７］、西尼罗河病毒、丙型肝炎病毒、基孔肯雅病毒、登革热病毒和Ａ型流感病毒等。Viperin能够抑制ＨCV非结构蛋白NS５Ａ的表达，并与细胞内囊泡膜蛋白３３ｋD（ＨVＡP３３）结合定位到脂滴，抑制NS５Ａ与ＨVＡP３３结合，阻碍ＨCV复制复合体在脂滴形成，减少ＨCVＲNＡ的复制，抑制病毒增殖。类似于ＨCV，Viperin也可以通过C端结构域与登革热病毒（DENV）非结构蛋白NS３结合抑制病毒复制，但该过程不通过定位脂滴实现。ViperinC端结构域在抗ＨCV和DENV中起关键作用，如在C末端保守性色氨酸后添加分子标记（如融合一个FLａｇ标签）可导致该蛋白抗ＨCV功能丧失。缺失N端５０个氨基酸对Viperin抑制DENV和ＷNV作用无显著影响，甚至切除N端７０个氨基酸对其抗ＨCV功能也无显著影响，表明N端结构域不是Viperin抗ＨCV、DENV和ＷNV的关键结构域［１０，２０］。无论体外还是体内实验，Viperin均表现出抗CＨＩＫV功能，N端结构域却起着关键作用［１５］。Viperin通过N端定位到EＲ、C端与细胞质Fe／S蛋白组装因子结合，再通过SＡM结构域的酶活性抑制森林脑炎病毒ＲNＡ的合成，起到抗病毒作用。JIANG等研究明，SAM结构域M1中3个保守氨基酸突变后，Viperin抗ＨCV功能显著降低，并与ＨCMV、ＷNV和DENV研究结果一致，说明SＡM结构域在抗病毒功能中也起着重要作用。Viperin基因敲除小鼠更易感染ＷNV，中枢和周围神经系统也出现较高的病毒载量，体内实验也进一步证明Viperin具有抗ＷNV的功能。Viperin能