CE-3植物组织或器官培养.pptVIP

第三章： 植物组织或器官培养 植物组织培养（plant tissue culture）是将植物器官、组织、细胞或原生质体等外植体材料在无菌条件下接种到人工配制的培养基上，在适当条件下诱发长成完整植株的技术。 一、植物细胞全能性的概念 植物再生是植物界存在的普遍现象 2、植物细胞全能性的概念 个体或组织、器官已经分化的细胞在适宜的培养条件下具有再生成完整个体的遗传潜能，称为植物细胞全能性(Totipotency) 。 植物体细胞和生殖细胞均具有全能性 实现植物细胞的全能性需要一定的条件 需要保持植物细胞结构和遗传信息的完整性 高度退化的细胞不具有细胞全能性 细胞全能性的实现途径 二、植物细胞分化 所谓细胞分化（differentiation）：在个体发育中, 细胞的后代在形态、结构和功能上发生差异的过程。 植物细胞分化的现象： 藻类单细胞植物体无分化 多细胞生物的分化（具有时间性和空间性等） 细胞分化的本质 从分化的遗传控制角度讲，细胞分化是各个处于不同时空条件下的细胞，基因表达与修饰差异的反应，所以，分化也可以说是相同基因型的细胞由于基因选择性表达所反应的不同表现型。 三、离体条件下植物细胞的分化 脱分化（Dedifferentiation): 已分化的细胞失去其分化特征，回复到分生组织状态或胚性细胞状态的过程，称为脱分化。 再分化（Redifferentiation): 已脱分化后的组织或细胞在一定的条件下，重新恢复细胞分化能力，经过器官发生途径或体细胞胚发生途径，进一步发育成完整植株的过程，称为细胞的再分化。 （一）细胞脱分化 脱分化与细胞分裂： 现在一般认为，脱分化发生在静止细胞第一次有丝分裂之前，即G0期静止细胞接受外界信号刺激后，由于细胞基因选择性表达，使细胞发生一系列生理生化变化，脱离G0期重新进入细胞周期。 静止细胞启动分裂是分化细胞成功脱分化的重要标志。 1、细胞脱分化的三个阶段 启动阶段：表现为细胞质增生，并开始向细胞中央伸出细胞质丝，液泡蛋白体出现； 演变阶段：细胞核开始向中央移动，质体演变成原质体； 终结阶段，细胞回复到分生细胞状态，细胞分裂即将开始。 2、影响细胞脱分化的因素a、生理或机械隔离 损伤刺激 损伤导致外植体产生生化反应，如气体交换律变化，呼吸活性的变化、酶活性的增加等。 马铃薯、胡萝卜和菊苣等储藏组织受伤后在20~24h可达到最大的呼吸速度，故有人将其称为“损伤呼吸”。 b、培养细胞的异质性 根据细胞类型不同从强到弱： 营养生长中心＞形成层＞薄壁细胞＞厚壁细胞＞特化细胞 根据细胞所处的组织不同从强到弱： 顶端分生组织＞居间分生组织＞侧生分生组织＞薄壁组织＞厚角组织＞输导组织＞厚壁组织 c、生长调节剂的影响 2，4-D诱导表达的基因par在细胞从G0期转入S期的早期启动中具有功能性作用； NAA诱导PSK基因表达， PSKα可能介导了与生长素和细胞分裂素密切相关的信号转导途径 。 激素对细胞脱分化的调控需要受体蛋白及其他信号转导过程的参与 。 激素在植物生长发育中具有重要的调控作用，也是离体培养条件下调控细胞脱分化和再分化的主要因素，其中生长素和细胞分裂素是两类主要的调控培养条件下细胞生长和分化的植物激素。此外，在有些试验中也显示，GA3、ABA、乙烯等也在细胞分化中起到一定的调节作用。 细胞脱分化调控的实质是G0期细胞回复到分裂周期的调控过程。 d、光线的影响 光线对外植体的最初的细胞分裂有明显影响。弱光下切取外植体，进行暗培养，有利于细胞脱分化。 外植体在DNA复制开始后，对光线表现则不敏感；在后续的培养期间，光线对生长也很少有刺激作用。 3、细胞分裂与愈伤组织形成 细胞脱分化是细胞状态的改变，成功的脱分化必然导致细胞分裂。 愈伤组织：植物细胞经过脱分化和细胞增殖形成的无特定结构和功能、无明显极性、无次生细胞壁和胞间连丝的多细胞团，称为愈伤组织(callus/Calli)。 愈伤组织培养过程 诱导期：外植体细胞进行分裂准备的时期 ； 分裂期：开始分裂并不断增生子细胞，形成愈伤组织； 形成期：由愈伤组织形成到器官发生时期，愈伤组织不再增殖，或形成拟分生组织，进一步分化为维管组织结节。 细胞脱分化与愈伤组织的关系 大多数情况下，细胞脱分化后进入细胞分裂的结果是形成愈伤组织，但并非所有的细胞脱分化的结果是形成愈伤组织。 愈伤组织内的细胞也并非都处于未分化状态，细胞状态存在一定差异。 脱分化只是细胞生理状态的改变，而形成愈伤组织只是离体培养过程中外植体的一个形态学变化阶段，两者之间没有必然联系。 特点：色泽鲜亮，结构致密，表面有突起 根据愈伤组织的形态特征，可以调整激素的配方： 鲜嫩、致密