第十一章 核酸的合成1.ppt

第十三章 核酸的生物合成 介绍几个有关的名词 中心法则 中心法则 遗传信息由DNA直接流向蛋白质，或蛋白质流向DNA或RNA则尚未有证据。 遗传信息从蛋白质到蛋白质？ 谁使它发生这种转变? DNA以半保留方式进行复制,亲代的DNA分子的一条DNA链保留在子代DNA分子中,可以使遗传信息准确地传递给子代细胞,保持其相对稳定性而不致发生变化,这对物种的保存与延续是十分重要的。 理论上还有其它的复制方式: 半保留 全保留 散布式 半不保留复制的验证: Pol I是典型的DNA聚合酶 Pol I不是大肠杆菌染色体DNA的复制酶 理 由: ⑴纯的酶催化核苷酸掺入的速度约为1,000个核苷酸/分钟，而体内实际的合成速度要比这高二个数量级。 ⑵一个大肠杆菌突变株，Pol I正常而染色体复制不正常。 ⑶另有一个突变株（Pol A-），其Pol I的活力仅为野生型的1％，但它的染色体DNA复制是正常的。 DNA链延伸 (5)DNA连接酶 　　　催化DNA双链中一条有缺口单链的3’-OH未端与5’-P连接形成3’,5’磷酸二酯键，反应需要ATP or NAD+供能。 在DNA复制、修复中起重要作用，在DNA重组中起重要作用。 (6)旋转酶 3.原核生物的DNA复制过程 大肠杆菌染色体DNA What sequence features does the replication origin of E.coli chromosomal DNA have? OriC, of 245 base pairs, was identified (using origin-lacking plasmids) to be the specific replication origin in E.coli chromosomal DNA; OriC contains a tandem array of three 13-mer with nearly identical sequences, and four 9-mer repeats; OriC contains 9 GATC (a palindrome) sequences, which can be methylated at the base ring of A; (2)DNA链的合成与延长: DNA链延伸 (3)链的终止 4.真核细胞的DNA复制 二、逆转录作用 以RNA为模板合成DNA称逆转录，在致癌的病毒中RNA也可以自我复制，还可以通过逆转录将RNA的遗传信息传给DNA，在致癌病毒中都含有逆转录酶，合成cDNA后，并整合至宿主细胞染色体DNA中去，得以表达。 线状DNA的末端复制 克隆羊“多莉”的研究者伊斯维姆.穆特　? 克隆羊“多莉” 三、DNA突变 DNA的碱基序列如果发生变化，转录出的RNA以及翻译出的蛋白质跟着变化，因而表现异常的遗传特征。DNA的突变有三种形式: (1)一个or几个碱基对被置换， a.转换：G变成A，C变成T; b.颠换：嘌呤变成嘧啶或相反。 (2)插入一个or几个碱基对(可逆) (3)缺失一个or几个碱基对(不可逆) DNA的突变可以是自发的，也可以由物理化学因素诱变，自发的机率很低，109个bp发生一次突变。 DNA复制的准确性 DNA突变频率１０－７－１０－９。 碱基配对的自由能在１－３千卡／摩尔，根据计算突变率为１０－２。 保证措施 DNA聚合酶的碱基选择作用 ３‘’５’的外切活性的校正阅读 　用缺失外切活性的Pol大片段（Klenow酶）测定，出错机率增加５－５０倍。 复制后的修复 　切除修复 　重组修复 四、DNA的损伤与修复: DNA的损伤往往造成死亡,生物体有一套修复机制，能够修复一定程度的DNA损伤，但仍有可能发生突变。 紫外照射，常常引起相邻的两个碱基之间形成共价键生成二聚体，T－T之间最为常见，其它的二聚体，数量较少，形成二聚体，阻碍了DNA聚合酶的作用，因而复制不能继续进行。 　AACGT-TAGC 　T-TGCAATCG 常见的修复有光修复、暗修复(酶的作用) 光修复 细菌在受紫外照射损伤后，如果用强的可见光(300-600nm)，最好是400nm照射，则大部分损伤的细胞可以修复，这个过程称为光复活作用。 由于光激活了光裂合酶，它能分解二聚体恢复原来状态，这是一种高度专一的修复形式，也只能使二聚体复原。 暗修复(酶修复) 　　　即在一系列酶作用下，将被损伤的部位切除，然后重新合成一段DNA链填补缺口，切除修复的过程。 识别: 切断:内切酶辨认切除损伤的5’切除，提供3’-OH 修复:DNA聚合酶I