2015年高二生物人教版选修一导学案：专题5　DNA和蛋白质技术 .docVIP

专题5　DNA和蛋白质技术 专题1 DNA的粗提取与鉴定 目标导航　1.了解DNA的物理性质。2.理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。 一、提取DNA的方法 1．提取生物大分子的基本思路 (1)选用一定的________或________方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 (2)DNA的粗提取就是利用DNA与________、________和________等在物理或化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 2．提取DNA分子的基本原理 (1)利用DNA的溶解性 ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一点，选择适当浓度的NaCl溶液就能使DNA溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。 DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。 溶解规律 2 mol/L NaCl 0.14 mol/L NaCl DNA 在NaCl溶液中，浓度为________ mol/L时溶解度________ 溶解 析出 蛋白质 NaCl浓度从2 mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大 部分发生盐析 溶解 由上表可以看出，在NaCl为2 mol/L时DNA________，而部分蛋白质发生盐析而生成________，通过过滤可除去部分________；NaCl为0.14 mol/L时DNA________，过滤可除去溶解的部分________。 ②DNA不____酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则____酒精。利用这一原理，可将DNA与蛋白质进一步分离。 (2)利用DNA和蛋白质对酶、________和________的耐受性不同 ①蛋白酶能水解蛋白质，但对________没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受________的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 ③洗涤剂能够溶解________，但对________没有影响。 (3)DNA的鉴定：DNA在沸水浴的条件下，遇________会染成________。 二、提取DNA及鉴定DNA的实验流程 1．实验材料的选取 实验材料的选择原则是选用________含量高的生物组织。有些材料不宜选用，如有些哺乳动物的成熟红细胞无细胞核，无法提取DNA。实验中一般选用________或________作为实验材料。 2．破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)动物细胞一般采用____________破碎的方法。 (2)植物细胞需要先用__________溶解细胞膜，再加入一定量________，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集________。 归纳总结　动、植物细胞在获取DNA滤液方面的比较 原理 方法 动物细胞(鸡血细胞) 在低渗溶液中会吸水涨破 在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液 植物细胞(洋葱) 洗涤剂能够溶解细胞膜 在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐，充分搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 3.去除滤液中的杂质 释放出的核物质是DNA、RNA和蛋白质等的混合物，根据不同的方案，可采用以下三种去除滤液中杂质的方案。 原理 方法 方案一 DNA在不同浓度的________溶液中溶解度不同 ①在滤液中加入NaCl，使其溶液浓度为2 mol/L，过滤除去不溶的杂质②调节滤液中的NaCl溶液浓度为0.14 mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中溶解的杂质 方案二 DNA对酶的耐受性 直接在滤液中加入________，____________中的________________能够分解蛋白质，反应10～15 min 方案三 DNA对高温的耐受性 将滤液放在________的恒温水浴箱中保温10～15 min，注意严格控制温度范围，使______沉淀，而________分子还未变性，可以将DNA与蛋白质分开 4.DNA的析出 (1)原理：DNA不溶于________，但细胞中的某些蛋白质则能溶于酒精。 (2)方法 ①将过滤得到的含DNA的黏稠物溶于________的NaCl溶液，再过滤得到含DNA的滤液。 ②向滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的、体积分数为______的酒精溶液，静置2～3 min，溶液中会出现________丝状物，它就是粗提取的DNA。 ③用玻璃棒沿同一方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。 (3)目的 ①析出DNA；②去除溶于酒精的杂质。 5．DNA的鉴定 (1)鉴定原理：DNA＋________________ (2)步骤 项目 两支20 mL的试管 1号 2号 实验步骤 加入2 mol/L的NaCl溶液 5 mL 5 mL 加入丝状物(DNA) √ 用玻璃棒搅拌 ________溶解 加入二苯胺试剂 4 mL 4 mL 沸水浴加热 5 m