分子生物学-4.ppt

3. 氨基酸的共价修饰 胶原中的脯氨酸、赖氨酸侧链发生羟基化； 蛋白质或酶的苏氨酸、丝氨酸或酪氨酸羟基发生磷酸化； 组蛋白发生乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化、SUMO 化及生物素化； 糖基化作用 (glycosylation) 使多肽链与糖链通过 N-连接或 O-连接形成糖蛋白。 位于高尔基体上的糖基转移酶催化 O-连接糖链的形成。 N-连接糖链在内质网膜上合成，在内质网腔内糖链转移到受体蛋白的 Asn 残基上；在高尔基体内，对糖链进行加工，形成成熟的糖蛋白。 N-连接糖蛋白的形成 内质网腔 胞浆 多肽链 多萜醇磷酸 糖链在多萜醇磷酸 (dolichol-P) 上合成，在内质网腔内糖链转移到受体蛋白的 Asn 残基上。 内质网腔 高尔基体 胞浆 在高尔基氏体内，对糖链进行加工，形成成熟的糖蛋白。 真核生物 hnRNA 的加工过程 富含嘧啶区 (15 b) G U A/G A G U C U A/G A C/U A/C A G N C A G 外显子 1 5’ 剪接位点 分支点 内含子 3’ 剪接位点 外显子 2 作为内含子起始和结束的 GU 和 AG 剪接点序列为剪接位点。 内含子-外显子连接部位及内含子的特征序列 与 GU 结合 与 A 结合 分支点 剪接体 Mozaffari-Jovin S, et al. Inhibition of RNA helicase Brr2 by the C-terminal tail of the spliceosomal protein Prp8. Science 2013, 341: 80-84. RNA 剪接调控 Brr2 蛋白是 RNA 解螺旋酶家族成员，能激活 snRNA 使其发挥剪接功能；而剪接体中的 Prp8 蛋白能抑制 Brr2的作用。 选择性剪接 (alternative splicing) 选择性剪接 (可变剪接) 是通过不同的剪接方式从一个 hnRNA 分子产生不同成熟 mRNA 分子的过程。所有这些 mRNA 分子均来自于同一个基因。 如果选择性剪接产生的 mRNA 分子仅在 5’ 和 3’ 非翻译区有差异，可产生相同的蛋白质，差异区对蛋白质翻译起调控作用。 如果选择性剪接产生的 mRNA 分子有不同的编码序列，将产生不同的蛋白质，常表现出组织特异性或阶段特异性。 Variants 变体 Isoforms 同种型 降钙素基因相关肽 降钙素 (二) 真核生物 rRNA 前体的加工 (1) 甲基化：A ? Am (2) 还原反应：U ? DHU (3) 核苷内的转位反应：U ? ? (4) 脱氨反应：A ? I 碱基的修饰方式 剪切 剪接 添加 修饰 (三) 真核生物 tRNA 前体的加工 (四) RNA 编辑 (RNA editing) mRNA 分子发生核苷酸的插入、删除或碱基替换，改变 DNA 模板的遗传信息，从而翻译出氨基酸序列不同的多种蛋白质。 人 apoB 基因 apo mRNA (145000 碱基) apoB100 (肝脏) (512 kD) apoB48 (小肠) (240 kD) 脱氨酶使 6666 位的 C 转变成 U， 导致 CAA (Gln) 转变为 UAA (终止密码子) Science 2011, 333:53-58. 对27人的全基因组和转录组测序结果进行分析，发现超过 10000 个外显子处的 RNA 序列与其模板 DNA 序列不匹配。利用质谱检测从这些 RNA 序列翻译出的多肽，它们不完全对应 DNA 序列。 通过 RNA 编辑或其他未知的作用机制置换了 RNA 的部分碱基，从而导致蛋白质的改变??? RNA 2012, 18:1586-1596. mRNA 降解调控 三种降解 RNA 的核糖核酸酶 (ribonucleases, RNases)： 核酸内切酶 (endonucleases)：切割 RNA 内部； 3’ 核酸外切酶 (3’ exonucleases)：从 3’ 端水解 RNA，发生在外切体 (exosome)； 5’ 核酸外切酶 (5’ exonucleases) ：从 5’ 端水解 RNA，需要脱帽酶 (decapping enzyme) 先去除 5’ 帽子结构。 外切体 (Exosome) Ski 复合物与外切体直接相互作用，形成一个降解 RNA 的通道。 Ski 复合物由 1 分子Ski2、1 分子 Ski3 和 2 分子 Ski8 构成。 外切体是一种蛋白质复合物，其核酸酶活性以 3’ ? 5’ 方向降解 RNA。 Ski2、Ski3 和