细胞生物学第三细胞生物学研究方法剖析.pptVIP

第三章 细胞生物学研究方法 1974年Steffensen等从HeLa细胞的多核糖体中分离出5SrRNA，并以125I标记制成探针，并测探出5SrRNA的基因在染色体上的位置。 具体过程是这样的，首先对载片上的人体细胞中期染色体进行原位变性，并加入探针，这时，探针只能和产生它的模板DNA互补，即进行分子杂交，而其他部位则不行。放射自显影暴露二个月后，发现在所有制片的染色体组中，一对一号染色体均被标记，标记的位置是短臂末端，这说明5SrRNA基因位于第一号染色体的短臂末端。 原位杂交技术首先是在光镜水平上发展起来的。 近年来随着免疫电镜技术的不断进步， 电镜原位杂交技术也得到了发展。 电镜原位杂交和光镜原位杂交的 基本原理是一致的 区别是探针的标记物不同，一般以生物素等一些小分子取代同位素或萤光素来标记特异核苷酸序列来制作探针进行原位杂交。然后用与胶体金相连的生物素的特异性抗体对原位杂交样品进行免疫反应，这样就可在电镜下观察到探针的位置。 近些年发展起来的免疫细胞化学（immunocytochemistry)开创了这方面研究这项技术主要是利用抗原和其相应的抗体能作特异性结合即免疫反应这一原理，来定位组织或细胞中蛋白质抗原成分的一类技术。 我们可以利用这一技术来对蛋白类抗原进行定位定性分析。虽然抗原和抗体的结合具有高度的敏感性和特异性，但是抗体与抗原的结合是看不见的，为了解决