液相色谱仪和色谱柱故障排除.ppt

xx/xx/xxxx ? Merck Editor: Presentation name here xx/xx/xxxx ? Merck Editor: Presentation name here 探索色谱新领域，默克与您共同努力！ 2005-03-16 台州 * 液相色谱仪和色谱柱故障排除 故障排除 ? 发现问题 ? 定位问题 ? 纠正问题 ? 防止问题的再发生 主要规则 故障特征 1. 色谱峰展宽 2. 压力升高 螺丝、金属箍、毛细管 相应的对策 1. 用配套的螺丝、金属箍和毛细管 2. 连接进样器和色谱柱之间的管道 (柱外死体积)应尽可能地短 螺丝、金属箍和毛细管故障 死体积 连接螺丝包括一个螺母和一个套在毛细管上的金属箍；它们必须和完全匹配 当完全匹配时，毛细管的顶端将和仪器或柱子的端口恰好吻合，而不至于形成死体积 死体积会导致出现肩峰和双重峰 注意： 不同生产厂家的螺丝和金属箍是不能通用的。 螺丝、金属箍、毛细管 毛细管 1. 从泵到检测器所有毛细连接中，毛细管的内径应逐渐减小。 (如泵-进样器连接用内径为0.5 mm的毛细管；进样器-柱子以及柱子-检测器连接 用0.2 mm的毛细管) 3. 大内径的毛细管导致宽峰 4. 太长的管子导致峰的分辨率差，特别是换用微径柱时 2. 在使用微径柱(3 mm或2 mm)或梯度解吸时，选择合适内径和合适长度的毛细管尤为重要 注意： 使用短的和内径小的毛细管可以将和毛细管有关的柱外体积 效应降到最低 螺丝、金属箍、毛细管 流动相的准备 1. 使用色谱纯的溶剂和优级纯的试剂 2. 用SS公司的0.45 μm 的滤膜将所用的溶剂和缓冲溶液过滤 3. 使用HPLC级(或梯度级)的溶剂(如MERCK的溶剂事先都经过过滤) 4. 使用醋酸盐缓冲溶液比使用磷酸盐缓冲溶液要好，但应注意醋酸盐缓 冲液在近紫外区的吸收 5. 使用酸或碱准备缓冲溶液要比使用盐好 6. 使用0.04%的叠氮钠溶液以防止流动相长菌 溶剂 流动相脱气 使用不脱气或脱气不完全的流动相会导致形成气泡、泵性能不稳定、检测器噪音高以及其它检测器故障 注意： 1. 加热是流动相脱气的最好方 法，但不方便 2. 氦气脱气也很方便，仅需几 分钟就可以完成 3. 真空过滤脱气效果较差，但 很方便，也很经济，不失为 一常规办法 溶剂 溶剂纯度的影响 溶剂中的杂质会导致出现“鬼峰”，特别是梯度解吸时 注意： 只能使用色谱级的溶剂! 不能使用旧的或未经过滤的缓冲溶液 溶剂 溶剂混合产生的问题 流动相中所使用的不同溶剂必须互溶 注意： 过高浓度的磷酸盐缓冲溶液可能会在有机溶剂中析出 流动相中溶剂不互溶会导致: 1. 基线漂移， 2. 保留时间的重现性差， 3. 出现肩峰和“鬼峰”的问题. 溶剂 样品的溶解 样品应该溶解于流动相中，如果样品在流动相中的溶解性实在太差，则应将进样体积降到很低(如1 μl) 选用不合适的溶剂溶解样品可能会导致 保留时间的重现性差，肩峰、双重峰和 “鬼峰” 溶剂 缓冲溶液和离子对系统 1. 应保持缓冲溶液的浓度在20 mM到50mM之间，以获得最佳的分析结果 2. 浓度过低的缓冲溶液体系会导致峰形差，分辨率低 3. 一种缓冲溶液的最有效的缓冲pH范围是偏离其pKa值? 1 pH单位 不同缓冲体系的缓冲范围 缓冲溶液种类 pKa 缓冲范围 磷酸盐 2.1 1.1 - 3.1 7.2 6.2 - 8.2 12.3 11.3 - 13.3 醋酸盐 4.8 3.8 - 5.8 柠檬酸盐 3.1 2.1 - 4.1 4.7 3.7 - 5.7 5.4 4.4 - 6.4 溶剂 故障特征 “鬼峰”(由已被污染的过滤头造成) 保留时间不断改变(由于过滤头堵塞或部分堵塞) 清洗步骤： 1. 水 2. 稀硝酸 3. 水 4. 异丙醇 5. 水 (超声波清洗) 流动相过滤头产生的问题 溶剂 进样体积 进样量过大会导致峰形不对称以及保留时间变短的问题 通常引起色谱柱过载或超出检测器的检测限是由于样品浓度过高而不是体积的问题 过大的进样体积会导致产生宽峰 注意： 使用微径柱时，必须保