实训卵磷脂的提取和其组成鉴定.docVIP

实训 卵磷脂的提取及其组成鉴定 一、实验目的 1、加深了解磷脂类物质的结构和性质 2、学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法 2、掌握卵磷脂的组成鉴定的原理和方法 二、实验原理 磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多（10%左右）。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。 新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。 卵磷脂分离提取的流程如下： 三、仪器和试剂 仪器 研钵、布氏漏斗、蒸发皿、水浴锅（沸水）、玻璃漏斗、玻棒、小烧杯、试管、纱布、酒精灯。 试剂 1、熟鸡蛋黄 2、红色石蕊试纸 3、95%乙醇 4、20%氢氧化钠溶液 5、钼酸铵试剂：将6g钼酸铵溶于15mL蒸馏水中，加入5mL浓氨水，另外将24mL浓硝酸溶于46mL的蒸馏水中，两者混合静置一天后使用。 6、丙酮 7、氯仿 8、10%溴的四氯化碳溶液 9、硝酸 10、1%硫酸铜溶液 11、10%醋酸铅溶液 四、操作步骤 （一）卵磷脂的提取 1、取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml 95％乙醇研磨，再加入20ml 95％乙醇充分研磨，减压过滤(应盖满漏斗)，滤干后，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。 将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物。 3、冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解。 4、在搅拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出，搅动使其尽量析出，将氯仿丙酮溶液倒掉，取沉淀。 （二）卵磷脂的组成鉴定 1、水解及三甲胺的检验 取一支干燥大试管，加入提取的卵磷脂，并加入5ml 20％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。并用玻棒加以搅拌，使卵磷脂水解，冷却后供下面检查用。 2、不饱和性检验 取干净试管一支，加入10滴上述水解液，再加入1-2滴10%溴的四氯化碳溶液，振摇试管，观察有何现象产生。 3、脂肪酸的检验 取水解液10滴，加1滴20％氢氧化钠溶液与5ml水，以硝酸酸化后加入10％醋酸铅2滴，观察溶液的变化。 4、磷酸的检验 取干净试管一支，加入10滴上述水解液和5-10滴95%乙醇溶液，然后再加入5-10滴钼酸铵试剂，观察现象；最后将试管放入热水浴中加热5-10min，观察有何变化。 5、甘油的检验 取试管一支，加入1％硫酸铜溶液1ml（二十滴），2滴20％氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入1ml水解液振摇，观察所得结果。 五、思考题 1、各实验的现象及结论分别是什么？ 2、实验中操作应注意哪些地方？