血清样品除白蛋白与IgG.docVIP

血清样品除白蛋白和IgG 实验前准备 Sigma PROT-BA kit（4 oC冰箱内的彩色盒）、平衡buffer（–20oC冰箱门上顶层）、2ml EP管； 平衡buffer: 取试剂盒中的粉末加入distilled water40 ml至50 ml配成，分装存于-20 oC； 分离柱的平衡 将medium震荡混匀后，加400 ul至分离柱； 12000g离心5-10 sec，弃收集管中液体； 加400 ul平衡buffer至分离柱中，12000g离心5-10 sec，弃收集管中液体； 加400 ul平衡buffer至分离柱中，12000g离心20-40 sec，弃下面收集管； 除白蛋白和IgG 加一定量（25-100 ul）的血清蛋白样品至分离柱的柱床斜坡，室温孵育5-10 min； 12000g离心1 min ，收集洗脱液； 将洗脱液加至柱床斜坡，室温孵育5-10 min，12000g离心1 min； 加100 ul 平衡液至柱顶，以洗脱未结合蛋白，12000g离心1 min； 去掉分离柱，盖上盖子，可保存于–80oC冰箱或者直接纯化（如果当天即用，则可暂时放于4oC）。