血清蛋白电泳(醋酸纤维薄膜法).docVIP

实验一? 血清蛋白电泳(醋酸纤维薄膜法) [目的]　　了解电泳法分离蛋白质的原理、操作方法及临床意义。 [原理]?　　带电荷的蛋白质，在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点不同，但大都在pH7以下，若将血清置于pH8.6的缓冲液中，则这些蛋白质均带负电，在电场中都向阳极移动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同，所以在电场中向阳极泳动速度也不同。蛋白质分子小而带电荷多者，泳动速度快；反之，则泳动速度慢。因此可将血清蛋白质依次分为清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白和g球蛋白五条区带，经染色可计算出各血清蛋白质含量的百分数。　　醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便及分辨率较高等优点，广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、同工酶的分离和测定。 [仪器与材料]??? 　 1．仪器：电泳仪、电泳槽、分光光度计或光密度仪。　 2．材料：醋酸纤维薄膜、培养皿、滤纸、镊子、点样器、直尺、铅笔、剪刀等。 [试剂]　 1．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH8.6，m=0.06)。称取巴比妥2.21克和巴比妥钠12.36克，溶于500毫升蒸馏水中，加热溶解。待冷至室温后，再加蒸馏水稀释至1000毫升。　 2．染色液。称取丽春红S0.4克及三氯醋酸6克；用蒸馏水溶解，并稀释至100毫升。　 3．漂洗液。3%(V／V)醋酸溶液