NY_T2769-2015牧草中15种生物碱的测定液相色谱-串联质谱法.docVIP

ICS 65.100.01 G23 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2769—2015 牧草中15种生物碱的测定液相色谱一串联质谱法 Determination of 15 alkaloids in forage—Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2015-05-21 发布 2015-08-01 实施 中华人民共和国农业部发布 刖 本标准按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。 本标准主要起草人:邱静、陈爱亮、李爽跃、赵小阳、杨曙明、于洪侠。 牧草中15种生物碱的测定液相色谱一串联质谱法 1范围 本标准规定了牧草中双氢麦角汀、麦角柯宁碱、麦角异柯宁碱、麦角克碱、麦角异克碱、麦角隐亭、麦 角异卡里碱、麦角辛、阿托品、惹卓碱、肾形千里光碱、千里光非灵、野百合碱、千里光宁和东莨菪碱15种 生物碱含量的液相色谱一串联质谱测定方法。 本标准适用于牧草中上述15种生物碱单个或多个成分含量的测定。 本标准方法的检出限和定量限：上述15种生物碱的检出限均为0.005 mg/kg，定量限均为 01 mg/kg0 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1词料采样 3原理 试样中的生物碱经碱性乙腈提取，基质固相分散净化后，用液相色谱一串联质谱多反应监测模式 (MRM)测定，外标法定量。 4试剂与材料 除另有说明外，在分析中使用分析纯试剂和GB/T 6682中规定的一级水。 1乙腈:色谱纯。 4.2甲酸:色谱纯。 4.3碳酸铵。 4.4乙酸铵:色谱纯。 5碳酸铵溶液(200 mg/L):称取100 mg碳酸铵，用水稀释至500 mL，混匀备用。 4.6乙酸铵溶液（5 mmol/L，含0.1%甲酸）：称取193 mg乙酸铵，加人0.5 mL甲酸，用水稀释至 500 mL，混勻备用。 7碱性乙腈溶液:取200 mL乙腈和200 mL碳酸铵溶液(4. 5)，混匀备用。 4. 8酸性乙腈溶液:取100 mL乙腈和100 mL乙酸铵溶液(4. 6)，混匀备用。 4. 9标准品：双氢麦角汀、麦角柯宁碱、麦角异柯宁碱、麦角克碱、麦角异克碱、麦角隐亭、麦角异卡里 碱、麦角辛、阿托品、惹卓碱、肾形千里光碱、千里光非灵、野百合碱、千里光宁和东莨菪碱，纯度 98. 0%，物质的英文名称、分子式及CAS号见附录A。 4. 10标准储备液:双氢麦角汀、麦角柯宁碱、麦角异柯宁碱、麦角克碱、麦角异克碱、麦角隐亭、麦角异 卡里碱、麦角辛、阿托品、惹卓碱、肾形千里光碱、千里光非灵为干态标准品，用乙腈配制成25 mg/L(麦 角异克碱、麦角异卡里碱和麦角异柯宁碱）、50mg/L(惹卓碱、肾形千里光碱和千里光非灵）、100mg/L (双氢麦角汀、麦角柯宁碱、麦角克碱、麦角隐亭、麦角辛和阿托品）的标准储备液，称取适量的野百合碱、 千里光宁和东莨菪碱标准品(精确到〇. 〇〇〇 1 g)，分别用乙腈稀释成1 〇〇〇 mg/L的标准储备液，一 18°C 保存，有效期6个月。 4. 11混合标准溶液:分别吸取适量15种生物碱标准储备液(4. 10)，用乙腈稀释双氢麦角汀、麦角柯宁 碱、麦角异柯宁碱、麦角克碱、麦角异克碱、麦角隐亭、麦角异卡里碱、麦角辛、阿托品、惹卓碱、肾形千里 光碱、千里光非灵、野百合碱、千里光宁和东莨菪碱浓度均为1 mg/L的混合标准溶液，一 18°C保存，有 效期3个月。 4. 12净化吸附剂：PSA(乙二胺-N-丙基硅烷），粒度40 jum。 13微孔滤膜22 jum，有机相。 5仪器和设备 1液相色谱一串联质谱仪，配有电喷雾电离源(ESI)。 2分析天平，感量o.ooo lg。 5. 3粉碎机。 5.4振荡器。 5. 5离心机，最高转速13 000 r/min。 5. 6氮气吹干仪。 5. 7涡旋仪。 5.8超声波清洗器。 6试样制备与保存 按GB/T 14699. 1的规定采集牧草样品。 1干草样品 将干草样品用四分法缩至50 g?100 g，经粉碎机粉碎，全部通过0. 42 mm孔径筛，混匀，常温储存 备用。 6.2鲜草样品 将鲜草样品于常温通风干燥或者自然晒干制成干草样品，然后按6. 1方法制备和储存。 6.3空白基质样品 取空白干草或鲜草样品，如为鲜草样品则先在70°C通风烘干，或者自然晒干制成干草样品，然后按 1方