研究发育生物学的模式生物.pptVIP

一、斑马鱼作为模式生物的起因 果蝇和线虫作为无脊椎动物发育生物学研究的模式物种已开创了分子发育生物学研究的先河，奠定了分子发育生物学的基础。这2个物种之所以成为模型，主要原因在于它们能将胚胎学和遗传学有效地结合起来。利用这2个物种，研究者不仅能看见其发育过程中的胚胎，而且能有效地诱导胚胎突变，并能观察到其突变是如何扰乱正常发育的。 然而20世纪90年代，在脊椎动物中还没有找到这样的模式物种。鼠类虽带动了现代高等遗传学(特别是基因转移方面)的发展，但其胚胎深埋于母体子宫中而无法进行胚胎学观察；爪蟾虽一直是胚胎学的好材料，但因繁育太慢而受到一定限制。因而，具有繁育力强、体外产卵、体外受精且胚体透明等生殖特性的鱼类自然成为发育生物学家们珍爱的对象，特别是近十几年来由于一批分子生物学家把目光转向了鱼，鱼已在揭示生命本质及其运行机制的发育生物学基础研究领域占有愈来愈重要的地位。 快速的繁殖周期和高度的产卵能力，胚体透明且发育速度快。 认为斑马鱼完全具备作为脊椎动物分子发育生物学甚至人类基因组计划模式种的条件，是理想的分子发育生物学研究的动物模型。 二、斑马鱼作为模式生物的原由 斑马鱼起源于印度和巴基斯坦，为小型的热带鱼类。其染色体数为50。成体长3－4 cm，孵出后约3个月可达性成熟。成熟的雌鱼每隔一周可产几百粒卵子，卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，在25～3 1℃之间发育正常。胚体完全透明，使得研究者不仅能跟踪观察每一个细胞的发育命运，而且也可观察到像原肠期的细胞运动、脑区的形成和心跳等胚胎发育事件(Wilson et a1．1 993)。 斑马鱼个体小，养殖花费少，能大规模繁育。据估算，在一个大的斑马鱼遗传学实验室，一尾鱼培育并保养一年，其耗费不到3美元，在此期间，它能产出几千个胚胎。此外，斑马鱼的精子还可通过冷冻来保存，给遗传操作和人工诱变提供了极为有利的条件，加之胚体透明，发育异常的突变体很容易被鉴定出来。由于这些原因，斑马鱼很快成为分子发育生物学家和遗传学家开展科学研究的宠物。 生命周期短，孵出后约3个月可达性成熟，繁殖快。 产卵多，卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体完全透明，使得研究者不仅能跟踪观察每一个细胞的发育命运，而且也可观察到像原肠期的细胞运动、脑区的形成和心跳等胚胎发育事件。 斑马鱼个体小，养殖花费少，能大规模繁育。 三、斑马鱼作为模式生物的特点及其应用 1．细胞谱系分析的优势材料——细胞命运的追踪发育生物学的主要研究方法之一是细胞谱系分析。 细胞谱系分析通过记录特定细胞在胚胎发育中的分裂历史，来揭示其特定的细胞发育命运，并观察其发育潜能。斑马鱼由于胚胎发育前期细胞分裂速度快、胚体透明、特定的细胞类型易于识别等有利因素，很快成为脊椎动物中最适于进行细胞谱系分析的物种。 用来进行斑马鱼细胞谱系分析的方法有3种，即直接观察法、遗传嵌合克隆分析法和颜料示踪分析法。这些方面的早期工作主要由俄勒冈大学斑马鱼研究中心的Kimmel，Warga和其合作者们完成。 斑马鱼的细胞谱系分析和细胞发育命运追踪已开始应用于组织器官的起源研究。 2．酵母式的单倍体发育潜能——省时诀窍 椎动物二倍体基因组分析的耗时性是发育生物学家和遗传学家头痛的难题，当杂合体动物产生后，必须耗费几个月甚至几年的时间来培育其F1代，然后再经多代的同胞交配来发掘出纯合的隐性突变体，才能揭示其表型特征。由Streisinger等(1981)在斑马鱼中创立的单倍体和二倍体雌核发育技术克服了这一难题。紫外照射失活的精子能用来受精卵子并能诱导单倍体发育。单倍体胚胎可发育出基本的体型；但表现有包括短尾、脊椎弯曲和水肿等多种畸形，并在受精后4 d左右死亡。单倍体胚胎可用来甄别影响基本体型的突变，但不能用于仔细的筛选，因为即使野生型的单倍体胚胎在很多结构中及后期发育进程中也有异常出现。 然而，将紫外线照射失活的精子与卵子受精后再采用静水压休克或热休克诱导第二极体保留或抑制第一次卵裂的方法可获得杂合的或纯合的雌核发育二倍体，且这些二倍体都可存活并可育。这样，一些隐性突变仅需一代或两三代就可得到鉴定。由于斑马鱼繁育一代仅需3个月左右，因此隐性突变很快就能鉴别出来，从而大大缩短了时间。 3．果蝇式的人工突变途径——饱和诱变 。 饱和诱变方案是20世纪80年代初在果蝇中开创的，它使得果蝇很快成为发育生物学研究的焦点。饱和诱变的基本原理是用化学诱变剂处理成熟的雄性个体，然后将其诱变了的精子与卵子受精，产生的个体通过三代繁育来筛选发育异常的胚胎。因为发育通道由一系列的分子事件控制，要想解析完整的发育过程，必须碰巧遇上影响每一系列事件的全部基因或几乎所有的基因。反过来说，这必须呈现大量的动物个体才可得到筛选。 迄今，这样的呈现