聚合酶链式反应的应用指南剖析.pptVIP

聚合酶链式反应的应用指南 * * PCR历史演变 PCR技术简介 PCR的临床应用 1984年，Kary.B.Mullis教授发明了具有划时代意义的PCR技术。并因此项技术于1993年获得诺贝尔化学奖。 1985年，实验室技术成熟并逐步在临床上应用。 二十世纪九十年代开始，在国内各级医院广泛开展。 2000年左右，全国开始规范化管理，工作人员需要培训资质，实验室需经过相关机构认证。 PCR历史演变 PCR技术简介 所谓PCR技术，指的是在体外，以某一保守区段为模板，以一对特异性引物进行诱导，以游离的碱基为原料，在Taq酶的催化下，对目的基因迅速扩增的一种分子生物学技术。 一、PCR的概念 1、体外扩增 2、迅速大量扩增 3、灵敏度高 4、特异性高 二、技术特点 变性：使双链DNA变为单链。 退火：使引物和互补模板结合 。 延伸：按5′→3′方向以引物为起始点复制 循环次数 DNA的链数 1 　 21 2 2 　22 4 3 　 23 8 10 　 210 1024 20 　220 1,048,576 30 230 1,073,741,824 10亿 三、PCR技术分类 1、普通PCR检测技术 2、实时荧光定量PCR检测技术 3、高敏感度内标荧光定量PCR检测技术 PCR的临床应用 用于苛养病原菌的鉴定 用于培养周期较长的病原菌检测 用于目前难以或者不能培养病原菌检测 病原菌载量分析 病毒类疾病诊断 需要快速汇报结果的病原菌检测 细菌或肿瘤细胞耐药基因检测 遗传代谢病的分子诊断 （一）、检测适宜人群 1、疑似肝炎患者。 2、需要进行抗病毒治疗效果评估患者。 3、需调整抗肝炎病毒治疗方案者。 4、有肝炎病史且已治愈的拟受孕及孕期女性。 5、有肝炎病史且已治愈的拟母乳喂养及哺乳期妇女。 6、有肝炎病史且已治愈的拟生育男性。 7、肝炎所致肝癌后做过肝移植手术以后患者。 8、血液制品及献血员筛查。 9、转氨酶正常、血清学指标改变后，需要停止药物治疗的患者。 一、乙型肝炎/丙型肝炎检测 （二）、如何检测 1、疑似病人随时抽血进行检测。 2、乙型肝炎患者抗病毒治疗期间，至少每3个月监测一次HBV-DNA水平。 3、对于抗HCV阳性者、考虑接受抗病毒治疗者，在开始治疗前、治疗第4周、第12周，均需要进行HCV-RNA检测。 4、有肝炎病史且已治愈的拟生育男、女性，应在受孕前进行病毒载量检测。 5、有肝炎病史且已治愈的孕期妇女，应在受孕早期、中期及晚期均进行病毒载量检测。 6、有肝炎病史且已治愈的生育后妇女，若想母乳喂养婴儿，应在哺乳期间，定期进行病毒载量检测。 7、献血员及肝移植术后患者应定期进行病毒载量检测。 （三）、标本采集 采集EDTA抗凝（紫帽血常规管）静脉血2-3ml。患者抽血前需要空腹。 注意：标本要及时送到实验室，尤其是丙型肝炎病毒，应于采血后尽快送检。 二、HPV（人类乳头瘤病毒）检测 HPV病毒感染与子宫颈糜烂、尖锐湿疣和宫颈癌等妇科疾病高度相关，其中高危型HPV持续感染时导致宫颈癌的主要原因，而且从感染HPV到发展成为宫颈癌大约需要10年时间。HPV感染所致宫颈癌是唯一一种病因明确，可以早期预防与治疗及彻底根治的肿瘤。 一项调查表明，我国约18%的女性高危型HPV检测阳性，但是25岁以上，有超过80%的人从未做过宫颈癌预防筛查。 （一）检测适宜人群 1、有性生活史的女性 2、有不洁性交史的男性或女性 3、疑似尖锐湿疣患者诊断 4、25岁以上女性健康普查 （二）、如何检测 疑似宫颈癌患者检测通常采用细胞形态学检测（TCT）和病原学检测两种方法。但由于HPV感染早期，细胞形态学改变不显著，单纯依靠TCT结果会造成漏检。采取PCR与反向杂交技术进行检测，是明确诊断的关键手段。 *