课题微生物的实验室培养(上课用)剖析.ppt

朊病毒（蛋白质病毒） 选择培养基 接种前准备 一、用肥皂洗手并使用酒精消毒。 二、顺序： 点燃酒精灯→酒精棉擦拭双手→酒精棉擦拭桌面 ③灼烧法： 器具： 条件： 适用范围： 酒精灯 接种环、试管口 涂布器 烧至暗红 接种环烧至暗红 （2）消毒的方法 杀死环境中的病原微生物 ①煮沸消毒法： 适用范围： 培养皿、餐具 100℃煮沸5—6min 条件： 巴斯德的鹅颈瓶实验 ②巴氏消毒法 ②巴氏消毒法： 适用范围： 牛奶的消毒 ③酒精消毒法： 适用范围： 实验者的手臂、实验台 条件： 80℃中15min或70—75℃中30min 75%的酒精 条件： ④紫外线消毒法： 适用范围： 用紫外线照射30min 接种室内空气、接种箱、超净工作台 超净工作台 接种箱 条件： 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 （1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 思考： 3、在实验室能吃东西吗？为什么？实验使用后的培养基应当怎样处理？ 例题．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A、防止杂菌污染 B、消灭杂菌 C、培养基和发酵设备都必须灭菌 D、灭菌必须在接种前 B 四、实验操作 实验目的： 用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基 1.计算 2.称量 3.溶化　4.灭菌 5.倒平板 操作步骤： 计算： 计算100mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 0.5g 1.0g 0.5g 2.0g NaCl 琼脂 蛋白胨 牛肉膏 用量 培养基组分 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 讨论： 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 斜面培养基 单菌落 （二）纯化大肠杆菌 （二）纯化大肠杆菌 斜面接种 穿刺接种 常见接种方法： 划线接种 涂布器 稀释涂布平板法 稀释涂布平板法 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 讨论： 第一步：避免接种环上原来可能存在的微生物污染培养物 每次划线前：杀死上次接种环上残留的菌种 操作结束：杀死残留菌种，避免细菌污染环境和操作者 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到单菌落。 接种完后要用记号笔在培养皿的侧面上写上日期和姓名 ②涂布分离法: 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等. 五、结果分析与评价 培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 * 专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养 到目前为止， 几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关 1、微生物的概念：是指形体微小、结构简单，借助显微镜才能看到的生物。 原核生物： 真菌： 原生生物： 病毒： 2、类群： 一、微生物的简介 细菌、蓝藻、放线菌、支原体等 酵母菌、霉菌、大型食用菌等 变形虫、草履虫等 HIV、噬菌体、烟草花叶病毒、SA