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骨髓检查及细胞化学染色检验 湖南省第二人民医院 邹国英 骨髓检查及细胞化学染色检验 掌握： 常用细胞化学染色（过氧化物酶染色、过碘酸-雪夫染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色、氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色、中性非特异性酯酶染色、碱性α-丁酸萘酚酯酶染色、酸性磷酸酶染色、酯酶双染色、骨髓铁染色）的原理、方法、结果分析和临床意义。 骨髓检查及细胞化学染色检验 熟悉： 正常血细胞对化学染色的反应。 骨髓检查及细胞化学染色检验 了解： 流式细胞仪的构造、原理、主要技术指标和临床应用。 染色体分析在临床血液学中的应用。 分子生物学检查在血液学中的应用。 常用FISH技术的种类、原理、方法和临床应用。 常用造血干/祖细胞培养的种类、原理和临床应用。 非显带染色体和显带染色体相关概念和技术。常见染色体数目和结构异常的有关概念和表示方法。核酸分子杂交技术原理和方法。聚合酶链反应原理和常用PCR产物检查方法。以PCR为基础的相关技术。基因芯片技术。 细胞凋亡概念，细胞凋亡形态学的基本变化及主要生物化学特征。细胞凋亡的机制。 细胞化学染色检验 细胞化学染色，是一种以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质作定位、定性及半定量分析的方法。 细胞化学染色检验 血细胞化学染色的基本要求是在原位显示细胞成分和结构，反应产物应是有色沉淀物，具有一定的稳定性。 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶、蛋白质等。 细胞化学染色检验 基本步骤 固定：蒸汽、液体固定 有色沉淀反应：偶氮偶联法、普鲁士蓝反应、雪夫反应、联苯胺法 复染 细胞化学染色检验 临床意义 辅助判断急性白血病的细胞类型 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断 观察疾病疗效和判断预后 探讨某些疾病的发病机制 一、过氧化物酶染色（POX） 原理： 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化，显棕色四甲基苯醌二胺，再加入亚硝基铁氰化钠与联苯胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位于细胞浆内酶所在的部位。 POX结果判断 细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。 （－） 无颗粒沉着；（a） （±） 颗粒细小 ，分布稀疏；（b） （+） 颗粒较粗，局灶分布；（c） （++） 颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/2~2/3 ；（d） （+++） 颗粒粗大，呈团块分布；（e） （++++） 全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核（f） 。 各种细胞过氧化物酶染色 骨髓片POX染色 临床意义 POX染色是辅助诊断急性白血病细胞类型的首选、最重要的细胞化学染色。 （1）粒系：POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分叶核粒细胞为强阳性。 嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光。 嗜碱性粒细胞为阴性。 临床意义 （2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性反应，颗粒细小，弥散分布。 临床意义 （3）其他细胞淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可作为原巨核细胞的一种标志物，有助于FAB M7的识别。 骨髓片POX染色 临床意义 （5）过氧化物酶染色 主要用于鉴别急性白血病类型， 急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和M2型反应最强，M1和M5型反应较弱， 故有助于区别M3和M5型。 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。 二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （NAP） 原理：（偶氮藕联法，Kaplow） 中性粒细胞内碱性磷酸酶（neutrophilic alkaline phosphatase, NAP）在pH9.2~9.8时，能水解磷酸萘酚钠，释放出磷酸与萘酚，再以重氮盐与萘酚偶联成不溶性有色沉淀于胞质内酶所存在的部位。 NAP结果判断 阳性结果为胞质内出现灰褐 色至深黑色颗粒状或片状沉 淀 ①（－）胞浆呈淡红色，为0分。 ②（＋）胞质出现灰褐色沉淀， 为1分。 ③（＋＋）胞质深褐色沉淀，为 2分。 ④（＋＋＋）胞质中已基本充满 棕黑色颗粒状沉淀，但密度较 低，为3分。 ⑤（＋＋＋＋）胞质全被深黑色 团块沉淀所充满，密度高，甚至 遮盖胞核，为4分。 三、苏丹黑染色 （SBB） 原理