高分子量裂褶多糖制备和结构鉴定.doc

A Thesis Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Science Preparation and structural analysis of high molecular weight Schizophyllan Candidate : Ye Cheng  Major  : Biochemical Engineering  Supervisor : Professor Yu Longjiang Vice-Prof Zhou Pengpeng Huazhong University of Science and Technology Wuhan, Hubei 430074, P. R. China March, 2007 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在 文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：  日期：  年  月  日  学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。  本论文属于  保密□ ，在_____年解密后适用本授权书。 不保密□。 （请在以上方框内打“√”）  学位论文作者签名：  指导教师签名：  日期：  年  月  日  日期：  年  月  日 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 摘要 选 取 一 株 裂 褶 菌 (Schizophyllum commune) ， 研 究 了 其 生 产 胞 外 多 糖 SPG （Schizophyllan）的发酵条件，从中分离出高分子量裂褶多糖SPG1，并对该多糖进行 了分离纯化工艺研究、结构分析，主要取得以下成果： 1)确定了裂褶菌适宜的培养基成分和发酵条件:以葡萄糖为最佳碳源，适宜浓度 15 ％；以酵母粉和NH4NO3为混合氮源，酵母粉和NH4NO3的适宜浓度分别为 0.8％，0.2％； K2HP04浓度为0.3％、MgSO4 浓度为 0.1％时，有利于多糖合成。发酵种子液适宜的种 龄和接种量分别为 108 h和 12％ (V/V)；摇床转速为 180 rpm；添加泡敌作为表面活 性剂可以改善发酵液的溶氧水平，有助于提高SPG的产量；发酵最适温度在 28～30 ℃之间；最佳初始pH为 6.5，培养周期为 132 h。在优化的培养条件下，胞外多糖产 量可达 38.1g/L。 2）通过对裂褶菌发酵罐培养的研究，确立了裂褶菌在发酵罐中生产胞外多糖的发酵 工艺。发酵罐培养适宜控制条件为:在通气速率为1.O vvm下，控制搅拌速率为300 rpm，到一段时间后再调整到450 rpm进行发酵。 3) 采用 0.4％活性碳脱色、酶-Sevag结合法除蛋白，无水乙醇醇析从发酵液中分离 多糖，可得裂褶多糖粗品。采用Sephadex G-200 柱层析洗脱的方法可以分离、纯化 得到SPG1的纯品。紫外光谱表明SPG1为不含杂质的均一多糖。 4) 气相色谱分析确定样品单糖组分为葡萄糖，相对分子质量为 436 kDa，相对红外 光谱、高碘酸氧化、Smith降解，13C－核磁共振等分析结果确定SPG1的结构:主链上带 有β-(1-6)-D-葡萄糖残基支链的β-(1-3)-D-葡聚糖。 关键词：裂褶菌；胞外多糖；分离纯化； 结构鉴定 I 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 Abstract The exopolysaccharide produced by Schizophyllum commune was selected, and the culture medium and conditions of SPG (Schizophyllan) fermentation was optimized. The progress of isolation, purification of SPG from fermentation broth was studied. The structure of the purified SPG was analyzed. 1) The optimal culture