Western印迹技术解说.pptVIP

Western印迹 实验目的 实验原理 Western印迹杂交法是利用特异性抗体做探针，对附着于固相支持体上的某些特异性蛋白进行鉴别和定量的方法。它具有固相操作简便及不必对细胞进行放射性预标记等优点。原理为：将待测样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳使蛋白变性并分离，用电转移方法转移到固相支持体上（NC膜、PVDF膜），滤膜与抗靶蛋白的非标记抗体反应，再用二级免疫学试剂进行检测。检测方法有放射性标记、酶标化学显色或酶标化学发光等。酶标化学发光法以其高敏感性、结果可在X光片上长期保存等优点而优于酶标化学显色法。 是蛋白水平检测，研究基因表达与功能的一种方法。 原理及步骤 T or cell 提取蛋白 聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离蛋白（SDS) 转移（印迹）于硝酸纤维素膜 加抗体检测某种特异性蛋白质 Western Blot Western blot 生物素