第11章 核苷酸代谢教材.ppt

11 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 11.1 核酸的酶促降解 11.2 核苷酸的分解代谢 11.3 核苷酸的生物合成 碱基(base) 核苷 常见（脱氧）核苷酸的结构和命名 核酸分子中核苷酸之间的共价键 DNA一级结构的表示法 11.1 核酸的酶促降解 生物体内存在多种降解核酸酶类，统称为核酸酶(nuclease)，在核酸降解和周转中起着重要作用。 脱氧核糖核酸酶(dexyribonuclease, DNase) 底物 核糖核酸酶 (ribonuclease, RNase) 核酸外切酶 (exonuclease) 方式 核酸内切酶 (endonuclease) 限制性内切酶：具有位点识别专一性的内切酶。 11.1.1 核酸酶 11.1.1.1 外切核酸酶 外切酶作用于核酸链一端，逐个水解下核苷酸， 是非特异性磷酸二酯酶。 11.1.1.2 内切核酸酶 内切酶特异地水解多核苷酸内部各键，是特异性强的 磷酸二酯酶。 牛胰核酸酶作用于嘧啶核苷酸磷酸二酯键，生成嘧啶 核苷-3?-磷酸或末端为嘧啶核苷-3?-磷酸的寡核苷酸。 许多RNAase都具有高度热稳定性。牛胰RNase具有高度热稳定性。牛胰RNase(RNaseⅠ)是最早分离纯化并结晶的第一个RNase，由124个氨基酸组成。 脱氧核糖核酸酶(DNase)：专一水解DNA。 内切酶：切断双链或单链。 外切酶：有5?→3?切割或3?→5?切割。 牛胰脱氧核糖核酸酶(DNase Ⅰ) 切割ds/ssDNA，产物为5?-磷酸为末端的寡核苷酸。 牛脾脱氧核糖核酸酶(DNaseⅡ) 降解dsDNA，产物为以3?-磷酸为末端的寡核苷酸。 尚未发现有碱基专一性DNase，但有序列专一性，即 限制性内切酶(restriction endonuclease)。 1979年，W. Arber, H. Smith和D. Nathans等发现 某些细菌细胞内存在一类能识别一定序列并水解 外源dsDNA的内切核酸酶。 限制性内切酶是具有高度专一性DNA内切酶， 是DNA分子操作中必不可少的工具酶。 限制性内切酶能识别 dsDNA分子上特定的位点， 将两条链切断，形成粘性末端或平齐末端，称为 限制性内切酶(restriction endonuclease)或 限制酶(restriction enzyme)。 细菌除具有限制性内切酶外，还具有一种对自身DNA起修饰作用的甲基化酶。 限制性内切酶和其相应的修饰酶对底物DNA的识别和作用的部位是相同的。 修饰酶使该部位上碱基甲基化，从而使限制性内切酶对这种修饰过的DNA不再起作用。 在细胞中，限制性内切酶可降解外源侵入的DNA，但不降解经修饰酶甲基化保护的自身DNA。 限制性内切酶具很强的专一性。对底物DNA有特异的识别位点(识别序列)，长度一般在4~8bp范围内。 通常具有回文结构(palindromic structure)。切割后 形成粘性末端(cohesive end)或平齐末端(blunt end)。 限制性内切酶是DNA分子剪刀，是DNA体外重组技术 和进行大分子DNA分析的重要工具。 限制性内切酶发现对基因工程研究有极大的促进作用。已发现数百种可用于DNA研究限制性内切酶、连接酶、 修饰酶等多种酶，总称为分子生物学技术的“工具酶”。 限制性内切酶命名较为特殊。(以EcoRI为例) 第1个大写E：大肠杆菌属名(Escherichia)第1个字母； 第2,3小写co：种名(coli)的头两个字母； 第4个大写R： 所用大肠杆菌的菌株； 第5个罗马字：从该细菌中分离出来这一类酶的编号。 核苷酸经核苷酸酶(nucleotidase)催化，水解为核苷及无机磷酸。 非特异性的核苷酸酶，能作用于一切核苷酸。 特异性强的核苷酸酶只能水解3?-核苷酸或5?-核苷酸，分别称为3?-核苷酸酶或5?-核苷酸酶。 核苷经核苷酶(nudeosidase) 分解为嘌呤或嘧啶和戊糖。 ①核苷磷酸化酶(nucleoside phosphorylase) 广泛存在于生命机体中，催化反应可逆； 腺嘌呤和鸟嘌呤经脱氨氧化转变为黄嘌呤再进行降解，不同种类的生物分解嘌呤的酶系不同： 灵长类,鸟类,爬行类,大多数昆虫嘌呤最终产物为尿酸； 除灵长类以外的哺乳动物,腹足类为尿囊素； 某些硬骨鱼中尿囊素再继续分解为尿囊酸； 大多数鱼类,两栖类中