第九章基因突变教材.ppt

第九章 基因突变 第一节 寡核苷酸介导的基因突变 第二节 盒式突变法 第三节 利用PCR进行DNA序列的突变 第四节 随机突变 基因突变是研究基因表达调控和蛋白质的结构功能 的重要方法 位点特异性突变 寡核苷酸介导的基因突变；盒式突变；PCR 随机突变 第一节 寡核苷酸介导的基因突变 步骤： （1）正链DNA的合成 （2）突变引物的合成 17-19个 ①特异性 ②避免自身的二级结构 ③位置尽量在中间 （3）异源双链DNA分子的制备 （4）转染 （5）突变体的筛选 （6）突变体的鉴定（测序） 1、Kunkel突变法 dUTP→ dUMP dUTP酶 dut- dUTP库↑ 尿嘧啶N糖基化酶 ung- 胸腺嘧啶残基被尿嘧啶所取代 利用Kunkel法，以M13噬菌体DNA为载体进行 寡核苷酸介导的位点特异性突变 2、硫代磷酸寡核苷酸介导的突变 某些限制性内切酶不能水解硫代磷酸（酯）核苷酸间连键 硫代磷酸寡核苷酸介导的突变 第二节 盒式突变法 第三节 利用PCR进行DNA序列的突变 1、在基因的5’或3’末端产生突变 2、重叠延伸和基因突变 （1）取代突变 （2）插入突变 （3）缺失突变 3、产生分子嵌合体 重叠延伸PCR对DNA片段进行剪接的原理图 利用双侧重叠延伸PCR，产生取代突变 利用双侧重叠延伸PCR，产生插入突变 利用双侧重叠延伸PCR，产生缺失突变 双侧重叠延伸及DNA分子嵌合体形成 单侧重叠延伸及DNA分子嵌合体形成 第四节 随机突变 1、化学、物理方法 亚硝酸、亚硫酸盐、羟胺、肼及弱酸水解 2、酶法 3、PCR法 改变dNTP的比率 4、DNA shuffling 酶法随机错误掺入进行突变的原理 * *