现代分子生物学第二章(第三版)_染色体与DNA2.ppt

第二章 染色体与DNA 主要内容： 1、染色体 2、DNA的结构 3、DNA的复制 4、DNA的修复 5、DNA的转座 回顾知识点 DNA的结构 一级结构：4种核苷酸的连接及其排列顺序。 二级结构：反向平行双螺旋。 高级结构：超螺旋。 DNA的二级结构 DNA双螺旋结构的要点 DNA的高级结构 超螺旋结构是DNA高级结构的主要形式。 内容提要： ● DNA的半保留复制 ●与DNA复制有关的物质 ● DNA的复制过程（大肠杆菌为例） ● DNA复制的几种主要方式 ●真核生物中DNA的复制特点 1、定义：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制。 2、实验证据（1958 Meselson 和Stahl ）： 3、DNA半保留复制的生物学意义： DNA的半保留复制表明DNA在代谢上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。 （二）与DNA复制有关的物质 1、原料：四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、 dCTP、dTTP) 2、模板：以DNA的两条链为模板链，合成子代DNA 3、RNA引物：DNA的合成需要一段RNA链作为引物 4、引物合成酶（引发酶）：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 5、 DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶 (1)都以dNTP为底物。 (2)都需要Mg2+激活。 (3)聚合时必须有模板链和具有3’-OH末端的引物链。 (4)链的延伸都方向为5'→3'。 6、DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。 但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来 DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用 7、DNA 拓扑异构酶(DNA Topisomerase)： 主要功能是消除DNA解链过程中所 产生的扭曲力。 拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区，同转录有关。例：大肠杆菌中的ε蛋白 拓扑异构酶Π：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子。同复制有关。 例：大肠杆菌中的DNA旋转酶 8、DNA 解链酶（DNA helicase) 通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。 E.coli中的rep蛋白就是解链酶，还有解链酶I、II、III。 9、单链结合蛋白(SSB蛋白)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 （三）DNA的复制过程（大肠杆菌为例） 双链的解开 RNA引物的合成 DNA链的延伸 切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 复制起点固定 1 原核一个复制子, 真核多个复制子 2. 一个复制子, (一般)两个复制叉; 3.前导链, 滞后链相对 4.在一个复制周期中, 真核为一次; 原核可同时进行多次复制, 形成多个复制叉 双链解开、复制起始 DNA的半不连续复制（semi-discontinuous replication) DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续复制。 在DNA复制过程中，前导链能连续合成，而滞后链只能是断续的合成5??3 ?的多个短片段，这些不连续的小片段称为冈崎片段。 大肠杆菌 1 双链环状DNA 2. DNA复制形式为θ型 3. 定点(ori) 开始双向等速复制 4. 两个复制叉在距起始点1800处会合(Ter-Tus复合物阻止复制叉的移动)。 5. 只有一个复制单元，但可有多个复制叉。 双链环状、θ型复制、双向等速 (四).复制的几种主要方式 1.线性DNA双链的复制 ①单一起点的单向复制。 (如腺病毒) 2 环状DNA双链的复制 ①θ型复制（如大肠杆菌）---单一起点的双向等速复制 滚环型： 单向复制的特殊方式 如：ΦΧ174的双链环状DNA复制型（RF） （1）不需RNA引物，在正链3‘－OH上延伸 （2）只有一个复制叉; D环复制 （五）真核生物中DNA的复制特点 1、真核生物每条染色体上有多个复制起点，多复制子 2、真核生物染色体在全部复制完之前,各个起始点不再重新开始DNA复制；而在快速生长的原核生物中，复制起点可以连续开始新的复制(多复制叉)。真核生物快速生长时，往往采用更多的复制起点。 3、真核生物有多种DNA聚合酶。 回顾知识点 1.新链同时合成