高分子物理 何曼君 第二章 4.pptVIP

五、分子量分布的测定 － 凝胶色谱法Gel Permeation Chromatography 1.基本原理 2.分子量标定曲线 3.普适曲线 4. 凝胶色谱的注意事项 要求：重点掌握凝胶色谱基本原理与数据处理 凝胶色谱的发展简史??? 凝胶色谱是十几年前才发展起来的一种新型液体色谱，是色谱中最新的分离技术之一．它的分离基础主要根据溶液中分子体积(流体力学体积)的大小． 用多孔性物质来按分子体积大小进行分离，在五十年前就已有报道． McBain用人造沸石成功地分离气体分子和低分子量的有机化合物． 1953年wheaton和BauMan用离子交换树脂按分于量大小分离了苷、多元醇和其它非离子物质． 1959年Porath和Flodin用交联的缩聚葡糖制成凝胶来分离水溶液中不同分子量的试样．这类凝胶立即以商品名称“Sephadex”出售，在生物化学领域内得到非常广泛的应用，这是凝胶色谱技术在水溶性试样的分离中首次取得推广应用，成为生物化学中一项常用的分离手段．在生物化学领域内，这种分离技术被命名为凝胶过滤． 有机溶剂体系的凝胶色谱首先需要解决适用于有机溶剂的凝胶的制备问题．凝胶的制备花了几年功夫才获得成． 1964年，Moore以苯乙烯和二乙烯苯在不同的稀释剂存在下制成一系列孔径不同的凝胶，这些凝胶可以在有机溶剂中分离分子量从几千到几百万的试样．翌年，Maly以示差折光仪为浓度检测器、以体积指示器为分子量检测器制成凝胶色谱仪，这些凝波和仪器立即被制成商品出售．这样，凝胶色谱技术很快就在高分子科学领域内被广泛应用，作为一种快速的分子量和分子量分布测定方法，取得很好结果，并被誉为近年来这方面一项技术上的重要突破． 优点：①快速（测定周期短） ②操作简便 ③数据可靠、重复性好，比以往的 分级快十几倍到几十倍 它已成为高化、生化、有机化学领域的一个重要的分离和分析手段 由于历史原因，凝胶色谱的理论发展、实验技术和应用开发主要在生物化 学和高分子化学领域内．对这项新技术，不同的工作者采用了不同的命 名，这就造成了文献中命名方面的混乱．文献中用过的名称有： 凝胶过滤(gel filtration)，分子筛过滤(molecular sieve filtration)，分子筛色谱(molecular sieve chromatography)， 排除色谱(exclusion chromatography)，分子排除色谱(molecular exclusion chromatography)，凝胶排除色谱(gel exclusion chromatography)． 有限扩散色谱(restricted diffusion chromatography)，凝胶扩散色谱(gel diffusion chromatography)． 体积色谱(steric chromatography)，凝胶渗透色谱(gel permeation chromatography)，液体排除色谱(Liquid exclusion chromatography)，凝胶色谱(gel chromatography)和体积排除色谱(size exclusion chromatography)． 一般来说，在生物化学界中常用的名称是凝胶过滤，在高分子化学界中常用的名称是凝胶渗透色谱(简称GPC)． 众说不一，主要是体积排除法 体积排除法： 限制扩散机理 流动分离机理 基本原理 ①分离的核心部件是一根装有高孔性载体的色谱柱，柱中充满溶剂。 ②高孔性载体表面和内部有着各种大小不同的空洞和通道 多孔性载体（填料） ③高分子试样位于柱顶，利用溶剂进行恒速淋洗:溶质随溶剂带动向下运动。最后流经整个色谱柱被淋洗出来。 柱后收集的带溶质的溶液称为淋洗液 从淋洗开始到溶质分子被带出所收集的淋洗液体积称为该溶质分子的淋出体积Ve : 当试样随溶剂进入柱中后 （1）比载体的最大的孔还要大的分子只能随溶剂流经载体颗粒之间，走的路径最短，最先淋洗出。 大尺寸分子的淋出体积为V0（被排除体积） （2）尺寸小于所有空洞的小分子除了走颗粒间、还要进入颗粒内的孔，走的路径最多，所以最后被溶剂冲洗出来，淋出体积为V0＋Vi （3）尺寸居中的分子除了走颗粒间的路径，还可以进入部分孔洞，流经路径在大尺寸分子与小尺寸分子之间，在两者之间被淋洗出来 淋出体积： ④总之，体积大小不同进入孔洞的能力不同，流经路径长短不同，淋洗出色谱柱的顺序不同：分子量大的淋出体积小，分子量小淋出体积大 由此，尺寸不同的分子得以分级。 凝胶渗透色谱分离过程 凝胶色谱仪流程 横坐标：淋出体积 纵坐标：溶液浓度