分子生物学第二章DNA的复制.ppt

DNA 的复制 DNA通过复制将遗传信息由亲代传递给子代；通过转录和翻译，将遗传信息传递给蛋白质分子，从而决定生物的表现型。DNA的复制、转录和翻译过程就构成了遗传学的中心法则。 RNA病毒的遗传信息贮存在RNA分子，遗传信息的流向是RNA通过复制，将遗传信息由亲代传递给子代；通过反转录将遗传信息传递给DNA，再由DNA通过转录和翻译传递给蛋白质，这种遗传信息的流向就丰富了中心法则的内容。 一. DNA复制概况 DNA在复制时，以亲代DNA的每一条单链DNA作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一条亲代DNA.这种现象称为DNA的半保留复制 (semi-conservative replication)。 DNA以半保留方式进行复制，是在1958年由M. Meselson 和 F. Stahl 所完成的实验所证明。 2、实验证据（1958 Meselson 和Stahl ）： 复制叉与复制子 DNA的复制是由固定的起始点开始的。一般把生物体的复制单位称为复制子(replicon)。 一个复制子只含一个复制起点。复制时，双链DNA要解开成两股链分别进行，所以，复制起点呈叉子形式，被称为复制叉(Replication fork)。 部分生物复制子的比较 DNA复制是从DNA分子的特定位置开始的，这一位置叫复制原点（复制起始点）（大肠杆菌用ori表示，酵母ARS）。是由一些具有特定核苷酸排列顺序的片段组成。富含A-T。 在原核生物中，复制起始点通常为一个，而在真核生物中则为多个。 DNA复制时，以复制起始点为中心，向两 个方向进行复制。但在低等生物中，也可 进行单向复制（如滚环复制）。 真核生物基因组可以同时在多个复制起点上进行复制，也就是说它们的基因组包含有多个复制子。 细菌、病毒和线粒体的DNA分子都是作为单个复制子完成复制的； 原核生物DNA的复制 双向复制( Bidirectional Replication ) 无论是原核生物还是真核生物，DNA的复制主要是从固定的起始点以双向等速复制方式进行的。 复制叉以DNA分子上某一特定顺序为起点，向两个方向等速生长前进。 DNA Synthesis 由于DNA双螺旋的两条链是反向平行的，因此在复制叉附近解开的DNA链一条是5’→3’方向，另一条是3’→5’方向，两个模板极性不同。 所有已知DNA聚合酶的合成方向都是5’→3’， 为了解释DNA的等速复制现象，日本学者冈崎（Okazaki）等提出了DNA的半不连续复制模型（semi-discontinuous replication）。 半不连续复制Semi-discontinuous replication冈崎片段 前导链的连续复制和滞后链的不连续复制在生物界是有普遍性的，因而称之为DNA的半不连续复制。 [3H] Thymidinepulse-chase labeling and alkaline sucrose gradient: discovery of semi-discontinousreplication 用3H脱氧胸苷短时间标记后提取DNA，得到不少平均长度为2-3kb DNA片段。 用DNA连接酶温度敏感突变株进行实验，在连接酶不起作用的温度下，有大量小片段累积，说明复制过程中至少有一条链首先合成较短的片段，然后再生成大分子DNA。 由于DNA聚合酶只能以5‘→3’方向聚合 子代DNA链，即模板DNA链的方向必须 为3→5。因此，分别以两条亲代DNA 链作为模板聚合子代DNA链时的方式是 不同的。 以3′→5′方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5′→3′，这一条链被称为前导链(leading strand)。 以5′→3′方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的聚合方向也是5′→3′，这条链被称为滞后链(lagging strand)。 由于亲代DNA双链在复制时是逐步解开的，因此，滞后链的合成也是一段一段的。DNA在复制时，由滞后链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段(Okazaki fragment)。 冈崎片段的大小，在原核生物中约为1000～2000个核苷酸，而在真核生物中约为100个核苷酸。 二. 参与DNA复制的酶 双螺旋DNA复制是DNA聚合酶催化的酶促反应过程。DNA聚合酶只能延长已有的DNA或RNA引物链，不能从头起始DNA链的合成； 在复制叉结构区内，DNA双螺旋中的两条链缠绕在一起，要拷贝每一条链都必须将双螺旋DNA解旋并释放或吸收由此产生的扭力，这就要求双螺旋和超螺旋的解旋与重新形成，DNA聚合酶不能完成这一过程; 在不连续合成中形成短的冈崎片段的连接也是DN