免疫学技术原理.ppt

载体 可溶性抗原 致敏 致敏颗粒 NS 凝集颗粒 间接凝集试验示意图 载体种类及其处理方法 红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。 聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒 1.正向间接凝集试验 2.反向间接凝集试验 3.间接凝集抑制试验 间接凝集反应的类型 用抗原致敏载体--检测抗体 正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 用抗体致敏载体----检测抗原 间接凝集抑制试验 用抗原致敏载体--检测抗原 间接血凝试验 间接乳胶凝集试验 概念 金黄色葡萄球菌协同凝集试验 间接凝集反应的应用 抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。 抗体的检测 　　检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。 1.孕妇尿中绒毛末促性腺激素含量明显增高 2.糖脂是结核杆菌细胞壁中的重要致病物质 3.检测猪血清中的猪瘟病毒抗体 4.猪口蹄疫的反向间接血凝集试验致敏红细胞诊断液的研制 应用举例 1．凝集反应的特点是什么？ 2．什么叫直接凝集反应，什么叫间接凝集反应？ 3．叙述间接血凝试验的原理。 思考题 “ ” “ ” 抗原抗体反应 主要内容 抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应的特点 影响抗原抗体反应的因素 免疫学检测技术的类型 思考题 小结 （一）抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 抗原表位与抗体高变区间的互补结合 抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合 抗原抗体之间的结合力 亲水胶体转化为疏水胶体 物质基础: 体内：表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素或引起免疫病理的损伤 体外：凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应 （二）抗原抗体反应的特点 特异性 可逆性 比例性 阶段性 特异性：抗原与抗体结合反应的专一性 抗原抗体反应特异性示意图 分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性 （1）特异性 两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应 交叉反应（cross reactions） 抗原抗体交叉反应示意图 Ag B (2)可逆性 可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 影响因素： 抗体对相应抗原的亲合力－亲合力越高，结合越牢固，越不易解离 环境因素对复合物的影响－pH、离子强度 前带(prezone)：抗体过量 后带(postzone)：抗原过量 等价带(equivalence zone)： 抗原抗体比例合适 抗原抗体反应比例性示意图 比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系 (3)比例性 第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象 (4)阶段性 A.抗原、抗体反应物的自身因素 环境因素 （三） 影响抗原抗体反应的因素 抗原:理化性状、表位种类和数目 抗体:来源、特异性、亲和性、效价 B.环境因素 电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH9 温 度: 15℃～40℃，37℃最适 反应类型 实验技术 结果判断 凝集反应 直接凝集试验 观察凝集现象 间接凝集试验 同上 抗球蛋白试验 同上 沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀，检测浊度 免疫电泳技术 观察扫描沉淀峰、沉淀弧 补体参与的反应 补体溶血试验 观察测定溶血现象 补体结合试验 同上 (四）免疫学检测技术的类型 反应类型 实验技术 结果判断 中和反应 病毒中和试验 检测病毒感染性 毒素中和试验 检测外毒素毒性 标记免疫反应 荧光免疫技术 检测荧光现象 放射免疫技术 检测放射性强度 酶免疫技术 检测酶底物显色 发光免疫技术 检测发光强度 金免疫技术 检测金颗粒沉淀 按实际用途分为:e ①免疫组织化学技术(immunohistochemistry techniqu,IHCT) ②免疫测定(immunoassay) 标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析 按测定反应体系的物理状态分为: ①均相免疫测定(homogenous immunoassay） ②非均相免疫测定(heterogenous immunoassay) 按检测现象分为: ①放射免疫技术 ②荧光免疫技术 ③酶免疫技术 ④化学发光免疫技术 ⑤金免疫技术 1．什么是抗原抗体反应？ 抗原抗体反应的原理是什么？ 2.抗原抗体反